α-硫辛酸对帕金森病模型自噬的影响及机制研究

发布时间：2020-06-26 08:50

【摘要】：帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种常见于中老年人的黑质纹状体通路变性导致的运动障碍疾病。目前,PD的治疗只局限于症状的缓解,无法阻止神经元的持续变性。寻找阻止疾病进展的有效药物一直是国际关注的热点。氧化应激和自噬在PD发病机制中发挥着重要作用,且两者之间存在复杂的作用网络。天然抗氧化剂α-硫辛酸(α-lipoic acid,ALA)可以通过抗氧化应激保护神经元,但对PD自噬的调节作用尚鲜有报道。本课题将结合PD细胞和动物模型深入研究氧化应激和自噬的相互作用机制,及ALA通过活性氧(reactive oxygen species,ROS)-腺嘌呤核糖核苷酸依赖的蛋白激酶(adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)及相关信号通路影响自噬的机制。本研究提出了ALA对于PD自噬的影响,并深入探讨其作用机制,将有助于深刻理解PD氧化应激和自噬的相互作用机制,为研发安全高效的PD药物治疗提供理论和实验依据。目的1.观察不同浓度及不同时间点的6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的存活率的影响,确定PD细胞模型的合适浓度及时间范围;观察ALA对6-OHDA诱导的帕金森病细胞模型的存活率、凋亡率、氧化应激水平的影响。2.观察ALA对6-OHDA诱导的帕金森病细胞模型自噬-溶酶体途径相关蛋白微管相关蛋白轻链3(Microtubule-associated protein l 1ight chain3,LC3)及自噬上游调控蛋白m TOR、AMPK表达水平影响。3.观察ALA对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠神经元的保护作用。方法1.根据不同浓度及作用不同时间6-OHDA对SH-SY5Y细胞活性的影响,选择合适的6-OHDA处理浓度及时间。利用SH-SY5Y细胞经过6-OHDA处理制作帕金森细胞模型,再给予ALA进行干预。采用CCK-8法测定细胞活性,AnnexinⅤ与PI共染法检测细胞凋亡,荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS的表达。2.GFP-LC3质粒转染观察GFP标记的LC3蛋白在帕金森细胞模型内的定位;Western blot法分析细胞内LC3-II、m TOR、磷酸化m TOR(phosph-m TOR,pm TOR)、AMPK、磷酸化AMPK(phosph-AMPK,p-AMPK)蛋白表达水平的变化。3.应用6-OHDA脑内注射建立PD大鼠模型,3周后进行各组大鼠的行为学检测,选取成功的大鼠模型,给予ALA药物干预2周后进行行为学检测,中脑黑质HE染色观察细胞形态,免疫组化法检测黑质酪氨酸羟化酶(throsine hydroxylase,TH)含量。最后均使用SPSS 22.0软件对结果进行统计学分析。结果1.6-OHDA对细胞活性产生了抑制作用,并且呈时间和浓度依赖性;6-OHDA组与对照组相比,细胞活性降低(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.01),氧化应激水平升高(P0.01)。与对照组相比,ALA组的上述指标均无明显变化;与6-OHDA组相比,ALA+6-OHDA组的细胞活性升高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.01)、氧化应激水平降低(P0.01)。2.6-OHDA组与对照组相比,LC3-II的表达升高(P0.05),其中6h时表达最高;6-OHDA处理SH-SY5Y细胞12h,p-AMPK的表达升高(P0.05),p-m TOR的表达降低(P0.05);与对照组相比,ALA组的上述指标均无明显变化;与6-OHDA组相比,ALA+6-OHDA组的LC3-II的表达降低(P0.05),p-AMPK的表达降低(P0.05),p-m TOR的表达升高(P0.05)。3.6-OHDA组与对照组相比,大鼠的行为能力明显降低,中脑黑质TH阳性神经元数量明显减少(P0.05);与6-OHDA组相比,6-OHDA+ALA组大鼠的行为能力显著性增高,黑质中TH神经元的数量增加(P0.05)。ALA低剂量组和高剂量组相比大鼠的行为能力和TH神经元数量无明显差异(P0.05)。结论1.6-OHDA诱导了SH-SY5Y细胞的氧化应激和自噬,降低了细胞活性,ALA可能通过抑制氧化应激、抑制AMPK/m TOR通路介导的自噬减轻了6-OHDA诱导的细胞氧化损伤。2.ALA对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠神经元有保护作用。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.5;R-332
【图文】：

12注:A: 流式检测各组 SH-SY5Y 细胞的凋亡；B: 流式结果的图 4 ALA 对 6-OHDA 诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡的影响（与对组比较bP <0.01）Fig 4 Effect of ALA on 6-OHDA induced SH-SY5Y cell apop

天津医科大学博士学位论文 1.2.4 6-OHDA 对 SH-SY5Y 细胞氧化应激的影响和 AL如图 5 所示 6-OHDA 组 SH-SY5Y 细胞 ROS 水组升高（P<0.01）；ALA 组细胞 ROS 水平较对照组组 SH-SY5Y 细胞 ROS 水平为 379.31±61.01%，较 6但较对照组升高（P<0.01）。ControlALAA

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 牟婕;冯文静;王珊;冯美苹;毛拥军;;自噬调控衰老的研究进展[J];中华老年多器官疾病杂志;2019年01期

2 李黎;季漪;李文婷;马艳霞;李沐涵;吴勉华;;基于细胞自噬的中医药抗肿瘤作用研究进展[J];中华中医药杂志;2019年01期

3 汪艳;;调控自噬在临床肝病治疗性应用的转化研究[J];肝脏;2019年07期

4 韩苏夏;蔡梦娇;;自噬在肿瘤治疗策略中的角色[J];西部医学;2018年09期

5 周岐鸣;刘洋;季光;宋海燕;;调节自噬改善非酒精性脂肪性肝病的药物研究进展[J];中华中医药学刊;2018年10期

6 李晓琼;何玲玲;李新毅;;自噬与中枢神经系统退行性疾病研究进展[J];中风与神经疾病杂志;2018年10期

7 马文科;戴舒惠;罗鹏;杨悦凡;费舟;;线粒体自噬的研究进展[J];现代生物医学进展;2017年06期

8 付婉;董笛;赵颖;;自噬的相关分子机制[J];中国生物化学与分子生物学报;2017年05期

9 方聪聪;毛善平;董慧敏;刘宝辉;王舜;;线粒体自噬与中枢神经系统疾病关系的研究进展[J];卒中与神经疾病;2017年02期

10 李旭卉;吴习习;张凯;罗海霞;李敏;;线粒体自噬与癌症关系的研究进展[J];动物医学进展;2017年09期

相关会议论文 前10条

1 肖伊宁;吕佩源;;选择性自噬的研究进展[A];7th中华医学会神经病学分会全国中青年神经病学学术大会暨第十届全国神经系统感染性疾病与脑脊液细胞学学术大会论文汇编[C];2014年

2 胡成枫;胡春兰;陈良标;;自噬在斑马鱼细胞冷应激过程中的作用机制探究[A];2017年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2017年

3 肖伊宁;吕佩源;;选择性自噬的研究进展[A];中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（下）[C];2014年

4 秦正红;粱中琴;陶陆阳;黄强;刘春风;蒋星红;倪宏;邢春根;;自噬在细胞生存与死亡中的作用[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年

5 秦正红;;自噬与肿瘤和神经细胞生存——药物作用的新靶位[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年

6 余慧芬;唐李;李妍;;自噬现象对肿瘤发生影响的研究进展[A];2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会论文集[C];2017年

7 王菲菲;邱学敏;王凌;;自噬对骨代谢的调节作用[A];第9届中国中西医结合学会妇产科专业委员会第二次学术会议论文集[C];2017年

8 申森森;李林楠;徐林楠;白玉;刘虎威;;基于气相色谱-高分辨质谱的饥饿诱导小鼠胚胎成纤维细胞自噬过程的代谢组学研究[A];第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集[C];2017年

9 任栓成;倪娜娜;胡志安;;睡眠觉醒期神经元自噬活动的变化[A];中国睡眠研究会第九届学术年会汇编[C];2016年

10 蒋绪顺;;自噬在棕榈酸诱导的足细胞凋亡中的作用及机制[A];2016年中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会学术年会论文摘要汇编[C];2016年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 李洁尉　通讯员 周飞;花榈木通过“自噬”杀死癌细胞[N];科学时报;2011年

2 王建新 主持;“自噬”的快车刚刚启动[N];医药经济报;2016年

3 记者 周洁;解密“自噬”，抗癌治病更近一步[N];河北日报;2016年

4 记者 陆琦 见习记者 谷双双;细菌通过诱导线粒体自噬求存活[N];中国科学报;2019年

5 本报记者 房琳琳;“自噬机制”带来对抗衰老新希望[N];科技日报;2016年

6 生命学院;俞立课题组在《科学》发文揭示自噬调控的重要机制[N];新清华;2012年

7 本报实习生 刘如楠 记者 李晨阳;最新研究揭秘植物是怎样衰老的[N];中国科学报;2019年

8 本报首席记者 唐闻佳;上海与新科诺奖得主颇有学术缘[N];文汇报;2016年

9 记者 陶婷婷;成功揭示代谢降解调控新机制[N];上海科技报;2013年

10 记者 白毅;浙大二院发现大气颗粒污染诱导呼吸道自噬性损伤新机制[N];中国医药报;2015年

相关博士学位论文 前10条

1 罗小暖;柯萨奇病毒B3型通过内质网应激引起自噬的研究[D];中国疾病预防控制中心;2018年

2 周丽娜;α-硫辛酸对帕金森病模型自噬的影响及机制研究[D];天津医科大学;2018年

3 夏广昊;人胰岛淀粉样多肽对β细胞自噬的影响及罗格列酮促进自噬机理研究[D];天津医科大学;2016年

4 杨洋;PGD2-DPs途径通过调控自噬参与糖尿病脑损伤机制[D];重庆医科大学;2019年

5 孙兰弟;基于提高亲电性的策略设计天然导向的抗炎试剂和自噬激活剂及其作用机制研究[D];兰州大学;2015年

6 杨烽;Klotho对糖尿病肾脏病中细胞自噬作用的影响及其机制研究[D];南方医科大学;2018年

7 曹文婷;miR-125b-5p在UVB影响SLE自噬中的作用机制[D];昆明医科大学;2018年

8 孙晓琪;雌二醇通过G蛋白偶联雌激素受体30 (GPR30)/ERK1/2信号通路调节MC3T3-E1细胞线粒体自噬的分子机制研究[D];中国医科大学;2018年

9 刘永一;自噬在棕榈酸诱导骨髓间充质干细胞凋亡中的作用及机制研究[D];中国医科大学;2018年

10 陈树东;慢性颈脊毮压迫的临床转归及自噬在脊毮运动神经元中的作用[D];广州中医药大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 叶妤;自噬调控慢性鼻-鼻窦炎中MUC5AC表达作用的研究[D];南昌大学;2019年

2 杨小玲;自噬和能量代谢影响兔iPSCs的诱导效率[D];广西大学;2019年

3 陈思;miR-101通过靶向Atg4D抑制矽肺大鼠肺泡巨噬细胞自噬的作用研究[D];华北理工大学;2019年

4 杨静亚;ATG4D对染尘后大鼠肺泡巨噬细胞自噬流的影响[D];华北理工大学;2019年

5 彭鑫;冬眠达乌尔黄鼠骨骼肌中自噬水平的变化与调控机制的研究[D];西北大学;2019年

6 王友娣;SIDT2在脂肪组织自噬和分化成熟中的机制研究[D];皖南医学院;2019年

7 张帆;MiR-130b通过TGF-β1通路调节自噬对糖尿病肾脏纤维化的作用和机制的研究[D];河南科技大学;2019年

8 陈柯;运动预处理对脑缺血卒中大鼠脑自噬水平及Parkin表达的影响[D];成都体育学院;2019年

9 龙梅芳;PNA-TPP激活ROS诱导自噬促进A549干细胞凋亡[D];南昌大学;2019年

10 雒斌;鄂尔多斯盆地白豹地区长7致密油成藏主控因素[D];西北大学;2019年

本文编号：2730102