Twist1抑制人皮肤成纤维细胞的复制性衰老
发布时间：2020-07-18 15:21
【摘要】：目的:探讨Twist1对人皮肤成纤维细胞复制性衰老的影响及其可能机制。方法:1、组织块贴壁法提取人皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblasts,HSF),通过连续传代建立5个HSF的复制性衰老模型。将传代的HSF分为年轻组(P3-7)、衰老组(P20-25),通过β-半乳糖核苷酶染色法比较细胞衰老染色率、5-乙炔基-2,脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2,deoxyuridine,Ed U)检测细胞增殖率的变化以及蛋白免疫印迹(Western-Blot)检测衰老相关蛋白p21表达的差异来验证复制性衰老模型是否成功建立。2、通过Western-Blot检测Twist1分别在年轻组与衰老组的表达情况。3、在年轻组中,通过分别转染Si-Twist1(Si-Twist1组)及其阴性序列(NC组),Western-Blot检测Twist1在Si-Twist1组中是否表达下调。并检测β-半乳糖核苷酶染色率、细胞增殖率及p21蛋白在Si-Twist1组与NC组之间的表达差异。结果:1、相比于年轻组,衰老组HSF的β-半乳糖衰老染色率明显增加,细胞增殖率明显下降,衰老相关蛋白p21的表达明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。这表明已成功建立了HSF的复制性衰老模型。2、Western-Blot检测发现Twist1蛋白在年轻组HSF中的表达水平显著高于衰老组(P0.05)。3、相比于NC组,Si-Twist1组的β-半乳糖核苷酶染色率升高、细胞增殖率下降及p21蛋白的表达升高(P0.05)。结论:Twist1在HSF的衰老过程中起重要作用,Twist1在衰老组HSF中表达明显下调。在体外抑制Twist1的表达可引起HSF的复制性衰老,这为探讨Twist1与HSF衰老的相关研究提供了依据。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R339.38
【图文】：
3.1 建立人皮肤成纤维细胞的复制性衰老模型通过连续传代培养得到原代 HSF 的方式建立复制性衰老模型，组织块贴壁法获得原代 HSF（图 1a），本实验共构建了 5 个复制性衰老模型，年轻组（P3-7）HSF（图 1b）呈长梭形，排列成束状，胞体饱满，衰老组(P20-25)的 HSF（图 1c）体积明显变大，胞体变平，细胞排列紊乱。结果显示如下：图 3-2 所示相比于年轻组，衰老组的细胞衰老染色率显著升高[(0.15±0.01)vs(0.50±0.01），t=26.72，P<0.01]。图 3-3 所示为通过 EdU 检测传代后细胞增殖率的变化，发现相比于年轻组，衰老组的细胞增殖率明显下降[(0.36±0.01）vs(0.10±0.01)，t=17.83，P<0.01]。图 3-4 所示为通过 Western-blot 检测衰老相关蛋白 p21 的表达变化，发现衰老组的 p21 蛋白的表达较年轻组明显增加[(1.04±0.25）vs(1.90±0.17)，t=2.82，P<0.05]。以上实验结果表明，已成功建立了 HSF 的复制性衰老模型。
图 3-2 年轻组与衰老组β-半乳糖核苷酶染色率的比较（a）年轻组的细胞衰老染色（x100）；（b）衰老组细胞衰老染色（x100）；（c）两组间细胞衰老染色率的柱状图图 3-3 年轻组与衰老组细胞增殖率的比较（x100）
图 3-3 年轻组与衰老组细胞增殖率的比较（x100）图 3-4 年轻组(P5)与衰老组(P25)中 p21 蛋白的表达变化3.2 Twist1 在衰老组 HSF 中显著下调收集同一个体来源的年轻组与衰老组的HSF，提取蛋白后，通过Western- blot检测 Twist1 在两组的表达情况。检测结果显示，Twist1 蛋白在衰老组的 HSF 中
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R339.38
【图文】：
3.1 建立人皮肤成纤维细胞的复制性衰老模型通过连续传代培养得到原代 HSF 的方式建立复制性衰老模型，组织块贴壁法获得原代 HSF（图 1a），本实验共构建了 5 个复制性衰老模型，年轻组（P3-7）HSF（图 1b）呈长梭形，排列成束状，胞体饱满，衰老组(P20-25)的 HSF（图 1c）体积明显变大，胞体变平，细胞排列紊乱。结果显示如下：图 3-2 所示相比于年轻组，衰老组的细胞衰老染色率显著升高[(0.15±0.01)vs(0.50±0.01），t=26.72，P<0.01]。图 3-3 所示为通过 EdU 检测传代后细胞增殖率的变化，发现相比于年轻组，衰老组的细胞增殖率明显下降[(0.36±0.01）vs(0.10±0.01)，t=17.83，P<0.01]。图 3-4 所示为通过 Western-blot 检测衰老相关蛋白 p21 的表达变化，发现衰老组的 p21 蛋白的表达较年轻组明显增加[(1.04±0.25）vs(1.90±0.17)，t=2.82，P<0.05]。以上实验结果表明，已成功建立了 HSF 的复制性衰老模型。
图 3-2 年轻组与衰老组β-半乳糖核苷酶染色率的比较（a）年轻组的细胞衰老染色（x100）；（b）衰老组细胞衰老染色（x100）；（c）两组间细胞衰老染色率的柱状图图 3-3 年轻组与衰老组细胞增殖率的比较（x100）
图 3-3 年轻组与衰老组细胞增殖率的比较（x100）图 3-4 年轻组(P5)与衰老组(P25)中 p21 蛋白的表达变化3.2 Twist1 在衰老组 HSF 中显著下调收集同一个体来源的年轻组与衰老组的HSF，提取蛋白后，通过Western- blot检测 Twist1 在两组的表达情况。检测结果显示，Twist1 蛋白在衰老组的 HSF 中
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 郭云;朱淑萍;沈金翠;王爱玲;邓兰;;VISIA对强脉冲光联合注射除皱治疗面部皮肤老化的定量评价[J];中国美容医学;2015年11期
2 师迎旭;杜华;郑国光;;人胚胎肺成纤维细胞复制性衰老模型的建立[J];中国老年学杂志;2014年08期
相关博士学位论文 前1条
1 汪r
本文编号：2761072
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/2761072.html
