小鼠脊髓Sall1的定位及SNI建模后的变化

发布时间：2020-08-28 03:42

【摘要】：神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是临床医学中的一个亟待解决的问题,导致患者虚弱且痛苦,并且很大程度上对目前可用的止痛药存在抵抗。有研究表明小胶质细胞与NP的形成有关,小胶质细胞的形态、表型转换、增殖在NP中发生改变。sall1主要表达于中枢神经系统中的小胶质细胞,是小胶质细胞的标识和非活性状态转录的主要调节因子,对维持中枢神经系统的稳态起至关重要。在NP下,中枢神经系统稳态发生紊乱,小胶质细胞被激活,sall1的表达是否因此发生改变?本研究建立了小鼠坐骨神经分支选择损伤模型(spared nerve injury,SNI),观察sall1在脊髓中的定位及建模后的表达,为进一步研究sall1调控小胶质细胞参与NP的发生和发展奠定基础。目的:建立SNI小鼠神经病理性疼痛模型,观察小鼠脊髓sall1的定位及建模后不同时间段内的表达变化。方法:(1)建立SNI小鼠模型:采用结扎并远端切断雄性BALB/c小鼠左侧坐骨神经的分支腓总神经和胫神经,保留腓肠神经的方法建立此模型,用Von Frey filaments测量小鼠后肢足底痛阈,计算50%的机械缩足阈值,测量SNI小鼠不同时间点机械痛阈的变化;(2)免疫印迹、实时逆转录PCR检测SNI小鼠术后3d、7d、10d、14d术侧L4-6段脊髓sall1的表达变化;(3)免疫组化检测sall1在脊髓的定位,及术后3d、7d、10d、14d术侧L4-6段脊髓背角累计光密度(IOD)的变化。结果:(1)SNI小鼠在术后第3d缩足阈值开始降低,术后7d下降最为明显,术后7-13d下降幅度缓慢,趋于稳定;与正常对照组及假手术组相比,术后3d起,各时间点差异有统计学意义(P0.05);(2)SNI小鼠L4-6段术侧脊髓的sall1蛋白及mRNA在3d、7d、10d、14d时表达水平均降低,7d时达最低值,至14d呈低水平表达状态,与正常对照组相比,上述各时点均具有统计学意义(P0.05);(3)免疫组化示sall1主要定位于L4-6段脊髓背角,SNI小鼠术侧脊髓背角sall1的累计光密度值3d、7d、10d、14d均下降,与正常对照组相比具有统计学意义(P0.05)。结论:(1)采用左侧坐骨神经分支选择损伤后,小鼠机械痛阈下降,成功建立了小鼠的神经病理性疼痛模型;(2)SNI模型建立后,L4-6段术侧脊髓的sall1蛋白及mRNA表达水平降低;(3)sall1主要定位于L4-6段脊髓的背角,建模后术侧脊髓背角sall1的累计光密度值下降。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R402;R-332
【图文】：

支配的后肢外侧缘区域出现明显的机械痛阈下降：术后降，14 天左右达高峰，可持续7-8 月。本文结果（图2即开始出现下降，术后3 天下降明显，直至术后7 天痛阈于稳定，其结果可能是有小鼠个体引起。SNI组与正常阈比较，痛阈下降明显，说明SNI模型建模成功。同时伤范围相对较小，神经纤维结扎的数目和类型确定，可经结扎数目和类型的不同，手术操者主观的原因造成的结扎的神经不波及到对侧的神经，因此镜像痛很少会发低，这些特点也许会使该模型成为研究NP机制的新工具

江苏大学硕士学位论文12图1.2 小鼠坐骨神经分支解剖图如图坐骨神经分为三支，分为粉色箭头所指的胫神经，紫色箭头所指的腓总神经和绿色箭头所指的腓肠神经。图 1.3 小鼠坐骨神经分支足部支配区域图如图小鼠足背和足底的不同区域由坐骨神经各分支支配，不同区域的交界处存在神经末端支配的重叠，小鼠足底外侧缘是主要由腓肠神经支配的。

12图 1.3 小鼠坐骨神经分支足部支配区域图如图小鼠足背和足底的不同区域由坐骨神经各分支支配，不同区域的交界处存在神经末端支配的重叠，小鼠足底外侧缘是主要由腓肠神经支配的。

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本文编号：2807050