Nocodazole对HFF细胞周期抑制和Rotenone促进HFF细胞衰老的研究

发布时间：2020-08-31 21:19

　　 目的:构建携带mAG-hGeminin-GFP报告质粒的人包皮成纤维细胞系,通过诺考达唑(Nocodazole)干预,探究Nocodazole对HFF细胞周期的影响。研究鱼藤酮(Rotenone)对HFF细胞衰老的影响,探究Rotenone促进衰老的相关分子机制。方法:1、构建构建mAG-hGeminin-GFP质粒,慢病毒包装,感染293T细胞,收集293T培养液感染HFF细胞。2、Thymidine-Nocodazole 顺序给药处理 mAG-hGeminin-GFP-HFF 细胞,流式细胞仪观察细胞周期的动态变化。3、不同浓度的Rotenone处理过的HFF细胞,显微镜下观察各个时间段细胞的形态变化,并计数。4、Western blot分析各组HFF细胞内P21、P16蛋白表达变化。结果:1、成功构建携带mAG-hGeminin-GFP报告质粒的HFF细胞;2、随着药物撤离时间的延长,越多的细胞被阻滞在G1-S期,GFP+细胞越来越少,衰老细胞富集在GFP+处;3、对照组和Rotenone加药组比较,加药组细胞体积增大,核固缩,边界不清晰,细胞大量死亡;4、与对照组相比,Rotenone 10 μM给药组细胞数明显减少(P0.0001),Rotenone 20μM给药组细胞数量显著递减(P0.0001),给药组间相互比较,也有显著的统计学差异(P0.01);5、与对照组相比,给药组P16、P21蛋白表达升高(P0.05)有统计学意义。结论:成功建立携带mAG-hGeminin-GFP报告质粒的HFF细胞,将细胞周期的动态变化可视化,便于更加直观地理解和观察。Thymidine-Nocodazole顺序给药会把大部分的HFF细胞阻滞在G1-S期,导致细胞衰老。Rotenone可能通过P21/P16信号通路促进HFF细胞衰老。图[6]表[2]参[59]
【学位单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R339.38
【部分图文】：

图１、流式细胞技术检测Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ对ＨＦＦ细胞的周期变化影响逡逑Ａ：释放Ｏｈ细胞周期变化；逡逑Ｂ：释放３ｈ细胞周期变化：逡逑

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本文编号：2809334