BAF45D蛋白优先表达在成体脊髓神经源区和神经元中并可能参与维甲酸诱导PAX6蛋白的表达

发布时间：2020-09-29 14:36

　　背景:成体神经发生是通过再生治疗人类中枢神经系统(CNS)疾病的重要过程,它通过招募成体神经干细胞(NSCs)这一过程来完成。NSCs具有产生星形胶质细胞、神经元及少突胶质细胞的能力。为了弄清参与成体神经发生过程中的调控因素,对于临床治疗应用具有重要的启发作用。这里我们报道BAF45D和GFAP在成年脊髓中央管(CC)中的共表达,而且通过定量数据分析,发现了BAF45D优先表达于成体中枢神经系统中的神经元。此外,PAX6是神经外胚层分化的一项决定因素,而P19细胞在神经外胚层分化过程中,BAF45D参与PAX6的表达。总的来说,我们的研究可能为BAF45D在成体神经元区的表达和对早期神经发展的作用提供一个新的视野。目的:主要研究方面:1):BAF45D在成体神经源区的表达;2):BAF45D和NEUN、BAF45D和GFAP、BAF45D和BETA-III-tubulin在成鼠脊髓中的共表达;3):探讨BAF45D蛋白,在维甲酸(RA)体外诱导P19胚胎癌细胞向神经元样细胞分化过程中的作用及其变化;方法:1):选用C57/BL6成年小鼠(10-12周,体重25-30g)制备脊髓横断面切片,并采用免疫组织化学技术(IHC)和免疫组织荧光技术(IF)检测BAF45D、NEUN、GFAP、BETA-III-tubulin蛋白在脊髓中的表达;2):选用维甲酸(RA 1μM)诱导鼠P19细胞向神经方向的分化,并且利用免疫印迹法(IB)技术检测BAF45D、OCT4、NESTIN和PAX6的表达情况;3):制备成鼠脊髓和海马组织的蛋白悬液,并运用免疫印迹法(IB)检测BAF45D、NEUN、GFAP、GAPDH的表达;结果:1):BAF45D在成鼠脊髓的非室管膜细胞核中,和中央管室管膜细胞核中均可以阳性表达;2):GFAP在细胞突起中的强表达,且BAF45D和GFAP可共表达在同一细胞中;3):BAF45D可在NEUN、BBETA-III-tubulin标志的神经元中的表达,且BETA-III-tubulin和BAF45D共表达在细胞质中;4):GFAP同时在脊髓灰质和白质中表达,而BAF45D和BETA-III-tubulin主要表达在灰质中;5):在RA诱导P19细胞的第5天时,光镜下观察细胞的形态,大部分都伸出突起样结构。而无RA诱导的P19细胞,维持原先细胞形态;6):在RA的诱导过程中,神经元特异性标志物Nestin随着诱导的时间延长,表达量也逐渐增加,说明了RA可以有效刺激P19细胞向神经细胞方向的分化;7):在RA诱导P19神经分化的过程中,Pax6在早期呈现出逐渐增加的趋势,在第四天达到高峰状态,随后其表达量又逐渐降低;OCT4的表达水平逐渐降低,可呈时间依赖性;BAF45D的表达量在逐渐增加,可呈时间依赖性;8):GFAP在脊髓中的表达明显多于海马;BAF45D和NEUN在海马中的表达稍多于脊髓;结论:1):BAF45D在成年鼠脊髓的中央管室管膜细胞中表达;2):BAF45D优先表达在成年鼠脊髓中的成熟神经元;3):维甲酸(RA)能成功的诱导P19细胞向神经方向的分化,而且分化过程中PAX6的产生与BAF45D是有一定联系的;
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R338
【部分图文】：

星形胶质细胞,神经元,箭头,三角

图 3.BAF45D 在成鼠脊髓的星形胶质细胞和神经元中的表达。A-D，BAF45D 在 GFAP标志的星形胶质细胞中的表达。长箭头表示 BAF45D 标志阳性的细胞（A，C，D）。而短箭头表示细胞核弱表达或未表达 BAF45D（A，C，D），三角箭头示 GFAP 在细胞突起中的强表达（B，D）。（E-H）BAF45D 在 NEUN 标志的神经元中的表达。长箭头表示 BAF45D 标志阳性的细胞 E-H，同时也表示 NEUN 标志阳性的细胞（F，H）。三角箭头表示 NEUN 在细胞质中的表达（F，H）。I-L，BAF45D 在 beta-III-tubulin标志的神经元中的表达。长箭头表示 BAF45D 标志阳性的细胞核（I，L）。三角箭头（J，L）和短箭头（I-L）表示 beta-III-tubulin 和 BAF45D 共表达在细胞质中。标尺=10μm。Figure 3 Expression of BAF45D in the neurons and astrocytes of the adult spinal cord.(A D) The expression of BAF45D in the GFAP-positive astrocytes. The arrowsindicate the BAF45D-positive cells (A,C,D). While the arrowheads indicate the cell

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安徽医科大学硕士学位论文AP in the cell processes (B,D). (E H) The expressve neurons. The arrows indicate the BAF45D-poalso positive for NEUN (F,H). The triangles indicateell cytoplasm (B,D). (I L) The expression of ositive neurons. The arrows indicate the BAF45D-pion of beta-III-tubulin, which is expressed in the cyplasmic BAF45D was shown (I L, arrowheads). Ba

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安徽医科大学硕士学位论文3.3 BAF45D 参与 P19 细胞向神经方向分化在 RA 诱导 P19 细胞的第 5 天，光镜下观察细胞形态，大部分伸出突起样结构（图 5B），而无 RA 诱导的 P19 细胞，维持原先细胞形态（图 5A）。在 RA 的诱导过程中，神经分化特异性标志物 Nestin 会随着诱导时间的延长，表达量也逐渐增加。说明 RA 可以有效刺激 P19 细胞向神经细胞方向的分化，据统计学分析，在 RA 诱导 P19 神经分化的过程中，Pax6 在早期会呈现逐渐增加的趋势，在第四天达到高峰状态，随后其表达量又逐渐降低，而 BAF45D 的表达量逐渐增加，并呈时间依赖性。以上结果表明：BAF45D 可能参与维甲酸诱导 PAX6 蛋白的表达。

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