LAMTOR1在β细胞胰岛素分泌中的作用及其机制研究

发布时间：2020-10-17 16:38

　　 目的:探讨LAMTOR1在小鼠β细胞胰岛素分泌中的作用及其分子机制。方法:以C57小鼠为背景构建LAMTOR1胰岛特异性敲除(β-LAMTOR1-KO)小鼠模型,通过蛋白质免疫印迹实验验证小鼠胰岛LAMTOR1基因的敲除。在体内通过腹腔葡萄糖耐量试验和高葡萄糖钳夹实验评估小鼠β细胞功能;利用胰岛灌注、线粒体功能分析和蛋白质免疫印迹实验研究探讨LAMTOR1在胰岛素分泌途径中的作用机制。结果:与对照组小鼠相比,葡萄糖耐量试验显示β-LAMTOR1-KO组小鼠葡萄糖水平更低,高葡萄糖钳夹和胰岛灌注实验过程中β-LAMTOR1-KO组胰岛素分泌水平显著升高。β-LAMTOR1-KO组小鼠胰岛细胞的线粒体功能障碍,但LAMTOR1缺失却增加了胰岛素颗粒中谷氨酸含量以及乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl-CoA carboxylase 1,ACC1)活性,最终导致β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加。结论:LAMTOR1对于维持胰腺β细胞的线粒体功能是重要的。尽管LAMTOR1的缺乏会损害胰岛β细胞线粒体功能从而导致胰岛素分泌的触发途径受损,但通过增加谷氨酸和ACC1代谢引起的扩增途径补偿了触发途径的缺陷并最终导致葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R587.1;R-332
【部分图文】：

第 2 章 探讨 LAMTOR1 在 β 细胞胰岛素分泌中的作用及其机制研究-ACC 单克隆抗体 美国 CST 公司CC 单克隆抗体 美国 CST 公司sp90 单克隆抗体 英国 abcam 公司过氧化物酶标记山羊抗兔 IgG+L）美国 CST 公司过氧化物酶标记山羊抗小鼠 IgG+L）美国 CST 公司 实验方法1 LAMTOR1 胰岛特异性敲除（β-LAMTOR1-KO）小鼠的构建以C57小鼠为背景设计获得LAMTOR1-floxed小鼠（南京模式动物研究建策略如图1所示，将所得纯和小鼠与胰岛特异性表达Cre重组酶的Ri进行杂交，进一步得到带有 Cre 的纯和 LAMTOR1-floxed 小鼠，AMTOR1-KO 小鼠。

[U-C]-Glucose ； E 组 ： LAMTOR1-floxed 小 鼠 胰 岛 + ]-Glucose；F 组：LAMTOR1-floxed 小鼠胰岛+ 16.7mM [U-13C]-G GLP-1。按照上述分组，将小鼠胰岛细胞置于 37℃培养箱中培养 33）采用 OptiPrep 密度梯度离心法分离胰岛 β 细胞的胰岛素颗粒，胰岛素颗粒中谷氨酸的 C13富集水平。果建 β 细胞特异性 LAMTOR1 基因敲除小鼠了探讨 LAMTOR1 在胰腺 β 细胞中的作用及其机制，我们通TOR1-floxed（LAMTOR1F/F）纯合小鼠与 RIP-Cre 小鼠杂交产生 βLAMTOR1 敲除小鼠（β-LAMTOR1-KO）。通过蛋白印迹分析，我AMTOR1-KO 小鼠原代胰岛细胞基因组 DNA 中 floxed 序列的缺失（MTOR1F / F 小鼠（同窝小鼠）相比，β-LAMTOR1-KO 小鼠的胰岛测不到 LAMTOR1 蛋白的表达。

第 2 章 探讨 LAMTOR1 在 β 细胞胰岛素分泌中的作用及其机制研究2.2 LAMTOR1 缺失对胰岛 β 功能的影响对10周龄β-LAMTOR1-KO和LAMTOR1F/F雄性小鼠进行体内腹腔葡萄糖耐量试验，比较分析显示与 LAMTOR1 F/F 组小鼠相比，β-LAMTOR1-KO 组小鼠的葡萄糖水平更低（图 3A）。如前所述，胰腺 β 细胞在糖尿病的发生发展中起重要作用，而葡萄糖刺激的胰岛素分泌对于维持 β 细胞的正常生理功能至关重要[19]。因此，我们进一步分析 LAMTOR1 缺失是否对小鼠 β 细胞功能有影响。我们利用实时荧光定量 PCR（Q-PCR）以确定几种相关基因的 mRNA 表达，包括 PDX1，INS2，GLUT2 和 GCK，其中 PDX1 和 INS2 是胰岛素生物合成的关键调节因子，GLUT2 和 GCK 分别与葡萄糖摄取和葡萄糖代谢相关[20]。结果表明这些基因的 mRNA 表达水平在两组之间相似（图 3B）。此外，对于禁食或喂食的小鼠，β-LAMTOR1-KO 和 LAMTOR1 F/F 组之间胰腺中总胰岛素含量没有差异（图 3C）。这些结果表明，β-LAMTOR1-KO 组中 β 细胞功能改善可能是由于葡萄糖刺激的胰岛素分泌的增强导致的。
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王建华;;低血糖那些鲜为人知的原因[J];心血管病防治知识(科普版);2017年06期

2 赵宗霞;王治荣;李芬霞;陈庆;;妊娠期糖尿病患者胰岛素分泌水平与超敏C反应蛋白的相关性[J];中国优生与遗传杂志;2016年11期

3 韩艳;张淑芹;严宏彬;;非糜烂性反流病与血糖、血脂及胰岛素分泌异常的相关性[J];海南医学;2014年23期

4 李红岩;刘永明;;信号分子溶血磷脂酸及其对胰岛素分泌的调节作用[J];华夏医学;2015年03期

5 李春昌;;正常人胰岛素分泌靠什么调节?[J];中国社区医师;2012年34期

6 陈立立;刘超;;钙通道对β细胞胰岛素分泌的调节作用[J];医学综述;2009年11期

7 石立;成金罗;李德;沈默宇;杨萍;;犬胰腺迷走神经切断对胰岛素分泌第一时相的影响[J];南京医科大学学报(自然科学版);2009年09期

8 ;重视初期胰岛素分泌的缺失[J];辽宁实用糖尿病杂志;2003年02期

9 ;瘦素灌注对大鼠胰岛素分泌的影响[J];第二军医大学学报;2001年11期

10 沈玉美,杨亚娟;1例X综合征的护理[J];解放军护理杂志;1996年02期

相关博士学位论文 前10条

1 徐连彬;氨基酸调控胰岛素分泌的作用与途径研究[D];山东农业大学;2019年

2 牛奔;丙型肝炎病毒对胰岛素分泌的影响及其对2型糖尿病诱发机制的研究[D];昆明理工大学;2017年

3 郝丽萍;酒精对胰岛β细胞胰岛素分泌及凋亡影响的研究[D];华中科技大学;2005年

4 董静;低氧对胰岛素分泌的调节[D];浙江大学;2006年

5 黄华宇;胰岛素分泌，离子通道性质及新型吸附材料研究[D];兰州大学;2009年

6 郭莉霞;京尼平苷调节INS-1细胞胰岛素分泌的分子机制研究[D];重庆大学;2011年

7 崔玉倩;睾酮对胰岛β-细胞胰岛素分泌和凋亡的影响及机制[D];山东大学;2012年

8 庞勃;GLP-1通过TRPM2调节葡萄糖刺激的胰岛素分泌[D];天津医科大学;2017年

9 吴振永;AMPA受体影响β细胞胰岛素分泌的机制[D];浙江大学;2011年

10 唐兆生;GPR40在INS-1细胞胰岛素分泌和脂性凋亡中的作用[D];华中科技大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 陈宇诗;2型糖尿病患者早相胰岛素分泌与颈动脉粥样硬化及尿微量白蛋白相关性研究[D];重庆医科大学;2019年

2 黄琼;LAMTOR1在β细胞胰岛素分泌中的作用及其机制研究[D];南昌大学;2019年

3 肖潇;阿托伐他汀对脂多糖诱导小鼠胰岛β细胞活力与胰岛素分泌的影响[D];湖南师范大学;2017年

4 靳俊;具有胰岛素分泌时滞及有氧运动的血糖代谢模型动力学分析研究[D];山西大学;2019年

5 刘萌萌;PACAP葡萄糖依赖性促进大鼠胰岛素分泌及机制研究[D];山西医科大学;2019年

6 韦玲静;GIPR/GIPR~(dn)胰岛特异性表达慢病毒制作及其过表达对β细胞胰岛素分泌调控作用研究[D];广西大学;2015年

7 刘倩;大鼠胰岛beta细胞P糖蛋白调节胰岛素分泌分子机制的初步研究[D];天津医科大学;2013年

8 赵春霖;AWRK6促胰岛素分泌和抑制Min6细胞凋亡的功能和分子机制[D];辽宁大学;2018年

9 朱楠楠;P糖蛋白调控β细胞胰岛素分泌的分子机制—脂筏蛋白间的相互作用[D];天津医科大学;2017年

10 陆相桐;MiR-29a与Cdc42在胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌过程中的作用[D];南昌大学;2018年

本文编号：2845050