产生大量IL-17的γδT细胞在沙眼衣原体感染中对Treg细胞的调节

发布时间：2020-10-19 14:19

　　 研究目的：γδT细胞是参与宿主固有免疫应答的主要效应细胞,是桥联固有免疫和适应性免疫的桥梁。有研究报道,IL-17~+γδT能够抑制调节性T细胞的增殖及功能。本研究利用TCRδ-/-小鼠探讨沙眼衣原体小鼠肺炎症中产生IL-17的γδT细胞对Treg细胞增殖的影响以及可能的作用机制,为γδT细胞与Treg细胞相互作用提供理论依据,也为固有免疫和适应性免疫的相互调节增添新的内容。研究方法：取6-δ周龄雌性WT(C57BL/6)和TCRδ~(-/-)(C57BL/6遗传背景)小鼠,经鼻吸入1×10~3 IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlymydia muridarum, Cm),诱导小鼠沙眼衣原体肺炎。在感染的不同时间点处死小鼠,收集肺泡灌洗液,制备肺组织单个核细胞悬液,用荧光素标记的抗鼠CD3、γδT抗体染色,流式细胞仪检测γδT的增殖利用细胞内细胞因子染色技术检测肺组织CD3~+γδT细胞及Vγ1和Vγ4γδT细胞亚群分泌IL一17水平；用ELISA方法检测WT和TCRδ-/-小鼠肺泡灌洗液中IL-17含量,探讨Cm呼吸道感染诱导的γδT细胞增殖及IL-17的产生。利用流式细胞术检测WT和TCRδ-/-小鼠脾脏及肺组织CD4~+CD25~+T及CD25~+Foxp3~+T细胞水平,确定沙眼衣原体呼吸道感染诱导的Treg细胞的增殖；进一步利用RT-PCR技术探讨WT和TCRδ-/-小鼠肺组织Treg细胞相应转录因子Foxp3 mRNA表达以及与Treg细胞活化及功能相关的细胞因子IL-2、TGF-β和IL-10 mRNA表达水平改变,从而探讨γδT细胞对Treg细胞增殖的影响以及可能的作用机制。实验结果：经鼻腔吸入一定剂量的Cm诱导小鼠沙眼衣原体肺炎及CD3~+γδT~+细胞在小鼠肺组织的增殖及产生大量IL-17。感染第1天CD3~+γδT~+细胞百分率即开始增高(*P0.05),于感染第7天达到高峰(***P0.001),随后降低,到感染第10天基本下降到未感染水平；细胞内细胞因子染色结果显示Cm感染诱导γδT细胞在感染第一天既分泌大量的IL-17(**P0.01),至感染第三天达到高峰(***P0.001),至感染后第五天γδT细胞产生IL-17的水平已显著降低(*P0.05)。进一步我们对小鼠肺组织存在的两个重要的γδT细胞亚群Vγ1和Vγ4 IL-17的分泌进行了研究,结果显示Cm感染小鼠肺组织Vγ1基本不分泌IL-17,而Vγ4则分泌大量的IL-17,尤其是在感染第3天(***P0.001)达到分泌高峰,随后迅速降低,至感染第10天降低至基础水平,其变化趋势与γδT细胞分泌IL-17一致。另外,我们的结果还证实,γδT细胞是感染早期IL-17的主要来源,TCRδ-/-小鼠肺泡灌洗液BAL中IL-17水平显著低于WT小鼠*P0.05)。Cm感染能够诱导小鼠外周免疫器官及局部炎症部位Treg细胞增殖。与WT小鼠比较,TCRδ-/-小鼠脾组织Treg细胞百分率在感染后第3天显著升高(**p0.01),而感染第7天则显著降低(**p0.01)；进一步肺组织中Treg相关转录因子Foxp3mRNA表达趋势与脾脏Treg细胞的变化一致(*P0.05),提示在Cm感染的不同时间点,γδT细胞通过不同的途径调节Treg细胞的增殖。进一步对其可能的调节机制进行研究,结果发现,感染后第3天WT和TCR6-/-小鼠肺组织Treg细胞活化因子IL-2 mRNA仅微量表达,而感染后第7天IL-2 mRNA在两组小鼠肺组织明显表达,且TCRδ-/-小鼠明显低于WT小鼠(**P0.01)。肺组织Treg细胞功能性细胞因子TGF-p和IL-10的PCR结果显示感染第3天TCRδ-/-小鼠IL-10水平明显高于WT小鼠*P0.05)而感染第7天IL-10分泌明显降低(*P0.05),与Treg细胞增殖变化一致,而肺组织TGF-β mRNA表达在两组小鼠未见明显差异。结论：Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织γδT细胞增殖并在感染早期分泌大量的IL-17,γδT细胞是感染早期IL-17的主要来源,其中Vγ4是分泌IL-17的主要γδT细胞亚群。Cm感染能够诱导小鼠外周免疫器官及局部炎症部位Treg细胞增殖,在Cm呼吸道感染中存在着γδT细胞对Treg细胞的免疫调节,但在感染的不同阶段调节机制不同,感染早期,γδT细胞可能通过分泌大量的IL-17抑制Treg细胞增殖,至感染中期IL-2的大量产生,可能是通过IL-2/IL-2R途径促进Treg细胞；在沙眼衣原体感染中,γδT细胞主要通过影响Treg细胞功能性细胞因子IL-10的表达介导Treg细胞的免疫抑制功能。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：R374
【部分图文】：

结果感染诱导 γδT 细胞增殖及产生大量的 IL-17 呼吸道感染诱导 γδ T 细胞在小鼠肺组织增殖T 细胞作为固有免疫细胞，在病原体入侵机体后可以是机体抗感染的第一道防线。我们用一定剂量的沙m）经呼吸道感染 WT 小鼠诱导小鼠衣原体肺炎，在，制备肺组织单个核细胞，利用流式细胞术检测 CD显示，小鼠肺组织中 CD3+γδ+T 细胞百分率在沙眼衣始增多（*P<0.05），至感染第 7 天达到最高水平（*复到正常水平。结果提示，沙眼衣原体呼吸道感染诱小鼠肺组织增殖。

Cm 感染诱导小鼠肺组织 γδ T 细胞 IL-17 的分泌及肺泡灌洗液 IL-17 水平 A、B Secrection of IL-17 by γδ T cells after Cm infection in WT miceproduction of IL-17 in BAL of WT and TCRδ-/-mice. The results were premean ± SD, *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001.γ4 为 Cm 感染后主要分泌 IL-17 的 γδT 细胞亚群据γ链和δ链的不同，γδT 细胞分为多个亚群，其中 Vγ1 和 Vγ4亚群，二者在多种免疫应答中具有不同的调控作用[43]。为进一的来源，我们利用细胞内细胞因子染色分别对 Cm 诱导的肺组织 泌 IL-17 水平进行测定。流式结果显示，在疾病进程中 Vγ1 基本IL-17+ Vγ1 仅占全部 γδT 的 1%左右（图 1.3A）；而 Vγ4 在未感染泌一定量的 IL-17(约 12.3%)，感染后第 1 天分泌量开始增高，第感染第10天基本恢复正常水平（图1.3B、C *P<0.05，**P<0.01，***P 细胞分泌 IL-17 趋势一致，结果提示，Vγ4 是沙眼衣原体呼吸道感

23.3 WT 小鼠在 Cm 感染后 Vγ1 和 Vγ4 分泌 IL-17 水平.3 Secrection of IL-17 by Vγ1 and Vγ4 T cells after Cm infection in WT mice. The were presented as mean ± SD, *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001.
【参考文献】

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1 唐莹莹;乔赛;赵慧丽;王悦;刘腾丽;邢冬红;张永慈;白虹;;沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染诱导肺组织中性粒细胞浸润及活化[J];中华微生物学和免疫学杂志;2014年12期

本文编号：2847322