MicroRNA-125b通过抑制TRAF6和NF-κB缓解肝缺血再灌注损伤的机制研究

发布时间：2020-10-19 14:48

　　 目的:探讨miR-125b缓解肝缺血再灌注损伤的相关分子机制,明确miR-125b在体内外模型中缓解肝缺血再灌注损伤的功能。方法:建立小鼠肝缺血再灌注体内、体外模型。使用qRT-PCR检测miR-125b、TNF-α、IL-1β、IL-6和TRAF6的RNA水平;使用免疫荧光评估p-p65、TRAF6在细胞中的定位与表达;使用Western Blot检测p-p65、p65、TRAF6、IL-1β的蛋白表达;使用ELISA检测TNF-α、IL-1β和IL-6的表达;使用HE染色观察肝脏组织的形态学改变;使用肝功能检测试剂盒检测ALT和AST的水平。结果:qRT-PCR结果显示肝缺血再灌注体外模型中miR-125b的表达显著下调(p0.05),而TNF-α、IL-1β、IL-6和TRAF6的表达显著上调(p0.05)。使用miR-125b mimics转染细胞上调miR-125b水平后,p-p65及TRAF6免疫荧光染色强度减弱,而miR-125b inhibitors则能逆转这一效果。使用miR-125b inhibitors下调miR-125b后,Western Blot结果显示p-p65、TRAF6及IL-1β的表达显著升高(p0.01),ELISA提示炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著升高(p0.05),HE染色观察到小鼠肝组织病理改变增加(p0.05),肝功能检测结果则提示血清ALT和AST水平显著升高(p0.05)。结论:miR-125b能够通过抑制TRAF6和NF-κB,下调炎性因子的释放并改善小鼠肝脏功能,从而达到缓解小鼠肝缺血再灌注损伤的目的。本文浅析了miR-125b缓解肝缺血再灌注炎症、改善肝脏功能的相关分子机制,验证了miR-125b在体内、体外实验中的抑炎功能,为临床肝缺血再灌注损伤的治疗提供了理论基础及潜在的治疗靶点。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R-332;R657.3
【部分图文】：

重庆医科大学硕士研究生学位论文小时组之间相比，miR-125b 水平并无显著差异。故最终选择缺氧时间（图 1a）。固定缺氧时间为 12 小时，设置复氧时间梯度 1、6、12、24 小 检测 miR-125b 表达水平的变化。结果表明：当复氧时间为 6iR-125b 显著下调，差异有统计学意义（ap<0.05）；当复氧时间为b 下调更加显著，差异有统计学意义（bp<0.01）。综上所述，我时、复氧 24 小时为最佳 H/R 时间组合，以进行后续实验（图 1

1 不同 H/R 时间组合下 miR-125b 的表达水平变 relative level of miR-125b upon different H/R timompared with Ctrl group.bp<0.01 compared with 25b mimics 和 inhibitors 后，检测 mi-125b mimics、inhibitors、NC 以及 ddwa情况。与对照组相比，miR-125b mimics 组ibitors 组 miR-125b 水平显著降低（ap<0.05）图 2），表明转染成功。

重庆医科大学硕士研究生学位论文3 转染 miR-125b mimics 和 inhibitors 后，检测 TRAF6 及炎性因 mRNA 变化对转染过的细胞进行 H/R 处理，检测炎性因子与 TRAF6 的 mRNA 水平变果提示，H/R 处理后，NC 组炎性因子与 TRAF6 的 mRNA 水平均显著高于对（ap<0.05）。转染了 miR-125b mimics 的细胞 TNF-α、IL6、IL-1β以及 TRAFNA 水平均显著低于 NC 组（cp<0.01），而转染了 miR-125b inhibitors 的细胞炎性因子与 TRAF6 的 mRNA 水平均显著高于 NC 组（cp<0.01）。该结果提示用 mimics 提高 miR-125b 的表达可以降低炎性因子的释放，miR-125b inhib可以通过下调 miR-125b 从而逆转这一情况，加重炎症的发生（图 3）。
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 郑树森;俞军;张武;;肝移植在中国的发展现状[J];临床肝胆病杂志;2014年01期

2 周维;谢肇;许建中;;miR-125b调节C3H10T1/2间充质干细胞中Cbfβ的表达[J];第三军医大学学报;2012年11期

本文编号：2847348