基因Ⅰ型乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原的免疫原性比较

发布时间：2020-11-05 22:21

　　 为了筛选出免疫原性最佳的基因Ⅰ型乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原,将基因Ⅰ型JEVGS株的prMEIII融合基因、polytope复合表位基因和prMEIII-polytope融合基因分别克隆构建到原核表达载体pET-30a上,经诱导表达纯化获得重组蛋白。将制备的重组蛋白免疫小鼠,通过ELISA监测体液免疫反应、通过噬斑减少中和试验滴定中和抗体滴度、通过细胞因子表达丰度和淋巴细胞增殖实验分析细胞介导的免疫反应,比较分析制备的乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原的免疫原性。结果表明:获得的分子量分别为35kDa(prMEIII)、28kDa(polytope复合表位抗原)和57 kDa (prMEIII-polytope)的重组蛋白均能诱导免疫小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫反应。与prMEIII-polytope和polytope重组蛋白免疫组相比,prMEIII蛋白可诱导免疫小鼠产生更高的IL-2和IFN-γ表达丰度和淋巴细胞增殖水平(P0.05)。prMEIII蛋白免疫小鼠诱导产生的中和抗体滴度接近于商品化乙脑减毒疫苗SA14-14-2 (P0.05)。上述研究结果表明,prMEIII重组蛋白可以作为乙型脑炎病毒亚单位疫苗的备选蛋白。
【部分图文】：

SDS-PAGE结果显示，重组prMEIII和prMEIII-polytope蛋白主要以包涵体形式表达，分子量大小分别约为35 kDa和57 kDa，重组polytope蛋白主要以可溶性形式表达，分子量大小约为28 kDa，进一步经镍柱亲和层析纯化，获得了纯度较高的重组蛋白(图2)。纯化的prMEIII、polytope和prMEIII-polytope重组蛋白的浓度分别是600μg/mL、800μg/mL和530μg/mL。图2 重组蛋白的诱导表达及可溶性分析

重组蛋白的诱导表达及可溶性分析

通过间接ELISA测定第0、7、14、21、28、35、42天收集的免疫小鼠血清中的特异性抗体。结果显示，3种基因重组表达的蛋白质免疫组和减毒疫苗免疫组均可诱导小鼠产生特异性抗体,但减毒疫苗SA-14-14-2免疫组诱导产生的抗体水平显著低于本研究所重组表达的蛋白免疫组(图4)。图4 特异ELISA抗体滴度动态曲线
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