结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白的原核表达及其表达条件的优化

发布时间：2021-01-01 03:06

　　目的原核表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuber-culosis,MTB）ESAT6-CFP10融合蛋白（recombinant ESAT6-CFP10,rEC）,并优化表达条件。方法以（GGGGS）3为linker将ESAT6和CFP10两个基因连接,合成rEC全基因,插入至载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-rEC,转化至感受态E. coli BL21（DE3）,筛选优势菌株进行诱导表达,并对诱导温度（25、30、37℃）、诱导剂种类及浓度（0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1. 0 mmol/L IPTG及0. 5、1、5、10、15、20 g/L乳糖）、诱导时间（2、3、4、5、6 h）、诱导起始A600（0. 4、0. 6、0. 8、1. 0）进行优化。菌种经5 L发酵罐发酵培养后,采用亲和层析及离子交换层析纯化rEC融合蛋白,于-20℃分别储存0、2、4、6个月,12. 5%SDS-PAGE分析rEC融合蛋白,并对保存0、6月的样品进行HPLC-SEC分析。结果重组质粒pET-28a-rEC经双酶切及测序鉴定,构建正确。rEC融合蛋白最适... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020年03期

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

重组质粒pET-28a-r EC的双酶切（ApaⅠ/XhoⅠ）鉴定

表达产物的SDS-PAGE分析

2 HPLC纯度检测结果

【参考文献】：
期刊论文
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[3]分枝杆菌RD-1区编码蛋白致病机制的研究进展[J]. 孟凡爽,张蕊,韩鹏,张文慧,张林波.  畜牧与兽医. 2018(01)
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本文编号：2950832