CQ复方对癌侵袭镜像痛模型小鼠的镇痛作用及机制研究

发布时间：2017-04-11 20:07

  本文关键词：CQ复方对癌侵袭镜像痛模型小鼠的镇痛作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的及依据癌症已经成为严重危害人类健康、导致现代人类死亡的第一大恶疾和顽症。癌痛是癌症患者最常见的临床症状之一,可以出现在癌症的任何阶段。其中癌侵袭痛(Cancer Invasion Pain, CIP)是由于肿瘤浸润引起的疼痛,在癌症患者上频发,是难治性癌痛之一。本实验发现CIP动物模型出现镜像痛(Mirror Image Pain, MIP),即在躯体损伤部位的对侧对称部位(镜像部位)亦出现疼痛和痛敏的病症。据研究报道,神经病理性疼痛、炎性疼痛、皮肤组织损伤性疼痛等多种动物模型均可以观察到双侧痛敏的现象,大鼠胫骨转移性癌痛模型也出现MIP现象。临床上,一些严重的慢性疼痛、复杂区域疼痛综合征、截肢及中风后遗症患者亦均可出现MIP,其中,癌痛患者出现的MIP既严重影响了患者的生存质量又干扰了癌症的治疗,是临床医生面临的棘手问题。我课题组根据中医理论创立了具有活血行气,祛风除湿,通络止痛作用的CQ复方,其主要成分是川芎嗪和青藤碱,前期的研究工作表明：CQ复方中的有效成分对多种神经源性疼痛及骨癌痛动物模型的镇痛强度类似于临床常用的非吗啡类镇痛西药加巴喷丁,机制研究显示,其镇痛效果与抑制纹状体细胞外液NE、Glu等神经递质的水平有关。但CQ复方对CIP及继发性的MIP作用如何,尚不明确。本实验采用S180肉瘤细胞构建小鼠癌侵袭镜像痛(Cancer Invasion Induced Mirror Image Pain, CIIMIP)模型,观察CQ复方对其的镇痛作用,检测脊髓内与疼痛发生和维持密切相关的兴奋性氨基酸(Excitatory amino acids, EAA)和抑制性氨基酸(Inhibitory amino acids, IAA)的水平、大脑皮质内内源性致痛和镇痛物质的含量及脊髓和血清内促炎性细胞因子含量,探讨上述物质在CIIMIP发生和维持及CQ复方镇痛作用的机制,进一步观察NMDA及GABAa受体拮抗剂对CQ复方镇痛作用的影响,探讨CQ复方通过EAA/IAA发挥镇痛作用的机制,为CIIMIP的机制研究和临床治疗提供参考。研究方法1小鼠CIIMIP模型的建立BALB/c雄性小鼠,连续3d进行预刺激,第4d将双侧后足机械缩足阈值(MWT, Mechanical withdrawal threshold)≥0.4g的小鼠随机分为正常组(Native)、操作对照组(Sham)及手术组(Surgery)。Surgery组于右腿股骨大转子处注射0.2mLS 180细胞液(活细胞浓度为1×107/mL),Sham组于相同部位注射等量的灭活的细胞液,Native组不作任何操作。于术前及术后第2-7d测评小鼠瘤株接种侧-癌侵袭侧及瘤株接种的对侧-镜像侧后足的MWT、癌侵袭侧的自由行走痛及自发性抬腿次数。2动物分组给药及药效学评价术后第5-7d连续3天,将Surgery组双侧MWT≤0.07g的成模小鼠随机分为模型组(Model)、CQ复方高剂量组(H-CQ,200mg/kg)、CQ复方中剂量组(M-CQ,150mg/kg)、CQ复方低剂量组(L-CQ, 100mg/kg)及阳性对照-加巴喷丁组(GBP,120mg/kg),术后第8、9、10d腹腔注射给药,其中,Native、Sham及Model组均给予等量的生理盐水,并于给药前及给药后30、60、90、120、180、240min等时间点测评癌侵袭侧及镜像侧后足的MWT。3神经递质、促炎性细胞因子水平的检测末次行为学测评的次日再次给药45min后,摘眼球取血后脱臼处死小鼠,取其大脑皮质及L3-L5段脊髓组织。采用高效液相-荧光法检测脊髓组织匀浆液内EAA (Glu、Asp)及IAA (GABA、Gly、Tau)的水平；放射免疫法检测大脑皮质中内源性致痛物质SP和镇痛物质DynA1-13、β-EP的含量；采用AimPlex流式高通量多因子检测技术分析血清内IL-6、MCP-1及脊髓内RANTES、MCP-3的含量。4 NMDA及GABAA受体拮抗剂给药成模小鼠随机分为荷包牡丹碱(Bicuculline, Bic)+CQ复方组(Bic+CQ)及盐酸金刚烷胺(Amantadine, Ama)+CQ复方组(Ama+CQ)两组,术后第8天给药,Bic+CQ组是在给予CQ复方15min前尾静脉注射GABAA竞争性受体拮抗剂-Bic 2mg/kg, Ama+CQ组是在给予CQ复方30min前灌胃给予NMDA非竞争性受体拮抗剂-Ama200mg/kg。并于-15min(给予Bic前)或-30min(给予Ama前)、0min(腹腔注射CQ复方前)及给予CQ复方后30、60、90、120、180、240min等时间点测评癌侵袭侧和镜像侧后足的MWT,观察NMDA及GABAa受体拮抗剂对CQ复方镇痛作用的影响。研究结果1小鼠CIIMIP模型的建立造模小鼠癌侵袭侧后足的MWT在术后第2d开始下降,第4-7d均稳定维持在(0.031±0.006)g～(0.057±0.029)g,明显低于Sham组和Native组(P0.05或P0.01)；镜像侧后足的MWT亦在术后第2d开始下降,第4-7d均稳定维持在(0.044±0.012)g～(0.101±0.038)g,明显低于Sham组和Native组(P0.05或P0.01)。而模型小鼠左前肢和腹部未见明显的疼痛表现。2 CQ复方对CIIMIP模型小鼠的镇痛作用及与加巴喷丁药效的比较CIIMIP模型小鼠第一次给予CQ复方后,双侧的MWT在给药后30min均开始升高,在30、60min达药效高峰。对癌侵袭侧,H-CQ组在给药后180mmin内5个时间点的MWT较Model组均显著升高(P0.01或P0.05),M-CQ组在给药后60、90min等2个时间点的MWT较Model组均显著升高(P0.05)。对镜像侧,H-CQ组在观察的180min内5个时间点的MWT较Model组均显著升高(P0.01或P0.05),M-CQ组在给药后30、60、90min等3个时间点的MWT较Model组均显著升高(P0.05)。连续给药3d,CQ复方对模型小鼠CIP与MIP的镇痛作用均略强于单次给药,但无显著性差异。而CIIMIP模型第一次给予加巴喷丁后60、90min达药效高峰,且在给药后观察的240min内所有时间点对癌侵袭侧及镜像侧的MWT较Model组均显著升高(P0.01)。连续3d给药,加巴喷丁对模型小鼠CIP与MIP的镇痛作用有下降的趋势,但无显著性差异。3 CIIMIP小鼠脊髓组织内EAA及IAA的含量及CQ复方对其的影响与Native组相比,Model组小鼠L3-Ls段脊髓内的Glu含量显著升高(P0.05),Asp无显著的变化；而抑制性氨基酸GABA、Gly、Tau含量均显著降低(P0.05,P0.01)。CQ复方能显著抑制模型小鼠脊髓内Glu水平(P0.05或P0.01),升高Gly、GABA及Tau的水平(P0.01),且对Glu、GABA及Tau含量的影响具有量效依赖关系。4NMDA及GABAa受体拮抗剂对CQ复方镇痛作用的影响预先给予Ama能显著增强CQ复方在给药240min内对CIP的镇痛作用(P0.01或P0.05),以及CQ复方在给药180min内对MIP的镇痛作用(P0.01或P0.05)；预先给予Bic能部分阻断CQ复方在给药后180min对CIP的镇痛作用(P0.05),以及CQ复方在给药后180min、240min对MIP的镇痛作用(P0.05)。5 CIIMIP小鼠大脑皮质内SP、DynA1-13、β-EP的含量及CQ复方对其的影响与Native组相比,Model组小鼠大脑皮质内内源性的致痛物质SP含量有显著性升高(P0.01),内源性的镇痛物质DynA1-13显著降低(P0.05),p-EP仅有降低趋势,CQ复方(低、中剂量)能显著降低SP含量(P0.05,P0.01),对DynA1-13、β-EP含量有升高作用,但无显著性差异。6 CIIMIP小鼠脊髓组织内RANTCS、MCP-3的含量及CQ复方对其的影响Model组小鼠脊髓内的趋化因子RANTES、MCP-3含量较Sham组均显著升高(P0.01,P0.05),CQ复方(低、高剂量)能显著降低模型小鼠脊髓组织内RANTES、MCP-3的含量(P0.05)。7 CIIMIP小鼠血清内IL-6、MCP-1的含量及CQ复方对其的影响与Native组相比,Model组模型小鼠血清中的IL-6、MCP-1含量均显著升高(P0.05),CQ复方均能显著降低模型小鼠血清内IL-6、MCP-1的含量(P0.01)。结论1采用S180细胞构建的CIIMIP模型小鼠镜像侧的镜像部位发生了与CIP趋势相同、程度近似的MIP。2CQ复方对CIIMIP模型小鼠CIP及MIP均有明显镇痛作用,且具有量效依赖关系。在该实验剂量下的CQ复方的镇痛效果不及加巴喷丁,但其达药效高峰的时间略早于加巴喷丁。3 CIIMIP模型小鼠脊髓内Glu显著升高,GABA含量显著降低,CQ复方可能通过抑制Glu水平,提高GABA水平,调节EAA/IAA平衡,进而缓解疼痛。NMDA及GABAA受体拮抗剂对CQ复方镇痛作用影响的实验结果进一步表明：CQ复方部分通过NMDA、GABAa受体发挥镇痛作用。4 CIIMIP模型小鼠大脑皮质内SP浓度异常升高、DynA1-13浓度明显降低,脊髓和血清内的IL-6、RANTES、MCP-1、MCP-3等促炎性细胞因子含量显著升高,CQ复方可能通过抑制SP及促炎性细胞因子的释放进一步发挥镇痛作用。
【关键词】：CQ复方 镜像痛 癌侵袭痛 神经递质 促炎性细胞因子
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 中文摘要6-10
• Abstract10-16
• 中英文缩略词表16-17
• 第一部分 实验研究17-57
• 前言17-23
• 实验一 小鼠CIIMIP模型的建立及疼痛行为学测评23-29
• 1 研究目的23
• 2 材料与方法23-24
• 2.1 动物及瘤株23
• 2.2 主要仪器设备23
• 2.3 动物模型的制备及分组23
• 2.4 疼痛行为学评价23-24
• 2.5 统计方法24
• 3 结果24-27
• 3.1 一般状态及肿瘤组织形态观察24-25
• 3.2 疼痛行为学的测评25-27
• 4 小结27-29
• 实验二 CQ复方对CIIMIP模型小鼠的镇痛作用及与加巴喷丁药效的比较29-37
• 1 研究目的29
• 2 材料与方法29-30
• 2.1 动物及瘤株29
• 2.2 主要仪器设备29
• 2.3 主要药品及试剂29
• 2.4 药效学评价29-30
• 2.5 统计方法30
• 3 结果30-35
• 3.1 CQ复方对CIIMIP模型小鼠的镇痛作用30-33
• 3.2 与加巴喷丁药效的比较33-35
• 4 小结35-37
• 实验三 CQ复方对CIIMIP模型小鼠的镇痛作用机制的研究37-49
• 1 研究目的37
• 2 材料与方法37-40
• 2.1 动物及瘤株37
• 2.2 主要仪器设备37
• 2.3 主要药品及试剂37-38
• 2.4 脊髓组织内氨基酸水平的检测38-39
• 2.5 NMDA及GABAA受体拮抗剂对CQ复方镇痛作用的影响39
• 2.6 大脑皮质内神经肽含量的检测39
• 2.7 脊髓组织及血清内促炎性细胞因子含量的检测39-40
• 2.8 统计方法40
• 3 结果40-46
• 3.1 CIIMIP小鼠脊髓组织内EAA及IAA的含量及CQ复方对其的影响40-43
• 3.2 NMDA及GABAA受体拮抗剂对CQ复方镇痛作用的影响43-44
• 3.3 CIIMIP小鼠大脑皮质内SP、DynA_(1-13)、β-EP的含量及CQ复方对其的影响44-45
• 3.4 CIIMIP小鼠脊髓组织内RANTES、MCP-3的含量及CQ复方对其的影响45-46
• 3.5 CIIMIP小鼠血清内IL-6、MCP-1的含量及CQ复方对其的影响46
• 4 小结46-49
• 讨论49-57
• 1 CIP模型小鼠MIP现象的发现49
• 2 CIIMIP模型小鼠MIP发生的机制49-53
• 2.1 MIP发生的中枢机制49-52
• 2.2 MIP发生的外周机制52-53
• 3 CQ复方镇痛作用及其机制53-57
• 第二部分 文献综述57-65
• 参考文献65-79
• 致谢79-80
• 在读期间发表的文章80-81
• 基金项目81-82
• 课题参与情况82

【引证文献】

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 孙晓芳;王丹巧;吴兆恩;李鹏;牛建昭;王继峰;王巍;;帕金森病模型大鼠血液和纹状体细胞外液左旋多巴药代动力学同步研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

2 黄东越;陈利海;任俞;陈国强;范秋维;于布为;;一种新的镜像痛模型的构建及镜像痛形成机制的探讨[A];2008年中华医学会全国麻醉学术年会论文汇编[C];2008年

  本文关键词：CQ复方对癌侵袭镜像痛模型小鼠的镇痛作用及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：299856