慢阻肺气虚证大鼠模型的建立及评价
发布时间：2021-03-05 20:16
目的为进一步研究慢阻肺相关机制及中医证候,建立病证结合的慢阻肺气虚证大鼠模型,探究慢阻肺气虚证大鼠模型评价指标。方法采用肺部滴入LPS合并烟熏和单纯肺部滴入LPS两种方法建立的慢性阻塞性肺疾病大鼠模型为研究对象,采用病理、肺功能等进行慢阻肺判定;通过宏观表征采集、体重观察、抓力测试、旷场实验、ATP含量和线粒体动力学蛋白印迹检测进行大鼠证候判定。结果从第3周开始,LPS联合烟熏组体重显著小于空白组和LPS组（P <0.05）,持续至第12周;第8周时,LPS联合烟熏组抓力最大值显著小于空白组及LPS组（P <0.05）,三组之间抓力平均值无统计学差异;LPS联合烟熏组旷场总距离和平均速率均显著小于空白组和LPS组（P <0.05）;第12周结束时,LPS联合烟熏组抓力最大值和平均值均显著小于空白组和LPS组（P <0.05）;LPS联合烟熏组旷场总距离和平均速率均显著小于空白组和LPS组（P <0.05）;第12周结束时,ATP含量检测结果显示,LPS联合烟熏组肺组织和骨骼肌中ATP含量较空白组有明显的下降（P <0.05）;LPS联合烟熏组骨骼肌A...
【文章来源】：世界科学技术-中医药现代化. 2020,22(05)北大核心
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
肺组织中Drp1、Mfn1蛋白检测结果
大鼠肺组织HE染色结果（×200)
本实验通过肺功能检测和病理结果可以判断大鼠是否处于COPD，综合宏观表征、体重、抓力、旷场实验可以判断大鼠是否为气虚证，从而确立COPD气虚证大鼠模型。COPD存在多种造模方式，如宋一平[8]最早在国内通过两次气管内注入LPS(200μg/次）及熏香烟4周的复合刺激法建立大鼠COPD模型，解决了单纯熏烟法难以复制出腺体增生肥大等重要病理表现的问题，但这种方法造模时间太短，对是否能成模存在很大的争议。李红梅[9]等使用熏烟加LPS和单纯烟熏的方法，并将单纯熏烟造模时间延长至3个月，结果发现烟熏联合LPS组更符合COPD死亡患者尸检病理改变，单纯烟熏组虽有类似病理改变，但是其程度甚至低于烟熏联合LPS 28天造模后大鼠的病理改变，可见单纯烟熏不仅造模慢，而且效果远远不如烟熏联合LPS。刘君波[7]等通过气管内反复滴入LPS 8周建立大鼠COPD模型，之后方苏榕[10]通过复制和比较90天香烟烟熏加气管内注入LPS、单独香烟烟熏及单独气道内注入LPS 3种方法，发现烟熏联合气管内滴入LPS的方法更为符合人类COPD特征变化。另外，李建生等[11]采用肺炎克雷伯杆菌滴鼻的方法连续滴鼻16周后制备COPD急性加重期大鼠模型。文文等[12]采用铜绿假单胞菌反复感染大鼠气道的方式可致大鼠产生COPD的病理学改变，以及蛋白水解酶诱导的COPD模型、基因调控COPD模型等[13]。考虑到吸烟是导致人类COPD和其他呼吸系统疾病发生发展的最重要因素之一[14]，烟熏联合LPS造模方法符合人类COPD病理变化，而单纯LPS滴入诱导的COPD模型是在短时间内造成肺及气管的损伤，相较于LPS联合烟熏制备的COPD大鼠模型，该模型可作为单纯因素疾病模型，对于研究COPD大鼠证候变化和机制区别具有重要的对比意义；另外气虚证多存在于COPD稳定期，细菌感染型建立的动物模型多处于COPD急性加重期[15]。因此，本实验中我们选择单纯滴入LPS和LPS滴入联合烟熏两种COPD疾病造模模型，动态观察12周，研究COPD大鼠模型疾病发生发展及证侯变化，通过对比两组大鼠第12周病理结果和肺功能发现两种造模方法在第12周均可以建立COPD大鼠模型，LPS联合烟熏组模型较LPS组更为典型。基于本课题组前期对血瘀证动物模型的研究经验[16-17]和临床上COPD气虚证的诊断标准和指标，课题组制作了COPD气虚证大鼠模型的等效指标转换表和宏观表征采集表，并对COPD其它证型的判断和鉴别制定了标准。在中医理论中，慢阻肺气虚证主要包括肺气虚、肺脾气虚和肺肾气虚，课题组将三种证候的共同症状归纳为主症和次症，主症包括神疲乏力、气短懒言、喘息和动辄加重；次症包括恶风自汗、舌淡苔白或有齿痕，脉沉虚。通过实验过程中对大鼠实际情况的观察，将气虚证共同症状等效转换为呼吸频率、呼吸幅度、自主活动、体重变化、抓取反抗、抓力测试、旷场实验行进总距离和平均速率等实际可观察的指标，满足等效指标三种及以上的情况，即认为气虚证成立，以判断病证结合模型是否建立成功。通过对各组大鼠12周各项数据结果分析发现：LPS联合烟熏组在第8周时，体重、旷场和抓力测试结果较空白组和LPS组都有明显的气虚证特征性改变；宏观表征采集表结果显示LPS联合烟熏组大鼠不仅有活动量和体质量增幅的减少，而且表现出蜷缩拱背、行动迟缓、神疲乏力、抓取反抗无力、毛失光泽、发黄、易脱落，偶可闻及呼吸道痰鸣音等表现，这些表现很大程度上符合中医理论对于气虚证的定义。到第12周时，这些症状更加明显，结合肺功能和HE染色结果，我们可以判断LPS联合烟熏组的大鼠模型不仅有COPD的病理表现，而且兼具气虚证的中医证型表现。
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性阻塞性肺疾病的发病机制研究进展[J]. 李锋,周新. 中国呼吸与危重监护杂志. 2019(01)
[2]重视慢性阻塞性肺疾病的预防与早期诊断[J]. 柳涛,杨汀,王辰. 协和医学杂志. 2019(01)
[3]线粒体融合与分裂的分子机制及相关疾病的研究进展[J]. 黄凯欣,熊艳,郑乐葳,叶啟发. 武汉大学学报(医学版). 2019(02)
[4]慢阻肺骨骼肌功能障碍的表现及影响因素[J]. 苏剑清,李培君,吴卫兵. 临床肺科杂志. 2018(12)
[5]慢性阻塞性肺疾病动物模型研究进展[J]. 蒋超文,陈琰,王斌. 中华肺部疾病杂志(电子版). 2018(04)
[6]基于“劳则气耗”理论研究气虚证动物模型的建立方法[J]. 陈进成,刘建勋,林成仁,任钧国,李磊,郭浩. 中国中药杂志. 2018(11)
[7]不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病患者病情及线粒体功能的影响[J]. 张少华,徐丹,闫雪娇,金晶,荆晶,姜敏,李争,高振,李风森. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(03)
[8]单因素诱导的慢性阻塞性肺疾病动物模型研究进展[J]. 李竹英,田春燕,高风丽. 中国中医急症. 2018(03)
[9]慢性心力衰竭心气虚证与线粒体能量代谢的关系探讨[J]. 陆璇,徐强. 光明中医. 2017(04)
[10]线粒体的融合、分裂与炎症反应研究进展[J]. 李香云,余剑波. 中国病理生理杂志. 2016(12)
本文编号：3065801
【文章来源】：世界科学技术-中医药现代化. 2020,22(05)北大核心
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
肺组织中Drp1、Mfn1蛋白检测结果
大鼠肺组织HE染色结果（×200)
本实验通过肺功能检测和病理结果可以判断大鼠是否处于COPD，综合宏观表征、体重、抓力、旷场实验可以判断大鼠是否为气虚证，从而确立COPD气虚证大鼠模型。COPD存在多种造模方式，如宋一平[8]最早在国内通过两次气管内注入LPS(200μg/次）及熏香烟4周的复合刺激法建立大鼠COPD模型，解决了单纯熏烟法难以复制出腺体增生肥大等重要病理表现的问题，但这种方法造模时间太短，对是否能成模存在很大的争议。李红梅[9]等使用熏烟加LPS和单纯烟熏的方法，并将单纯熏烟造模时间延长至3个月，结果发现烟熏联合LPS组更符合COPD死亡患者尸检病理改变，单纯烟熏组虽有类似病理改变，但是其程度甚至低于烟熏联合LPS 28天造模后大鼠的病理改变，可见单纯烟熏不仅造模慢，而且效果远远不如烟熏联合LPS。刘君波[7]等通过气管内反复滴入LPS 8周建立大鼠COPD模型，之后方苏榕[10]通过复制和比较90天香烟烟熏加气管内注入LPS、单独香烟烟熏及单独气道内注入LPS 3种方法，发现烟熏联合气管内滴入LPS的方法更为符合人类COPD特征变化。另外，李建生等[11]采用肺炎克雷伯杆菌滴鼻的方法连续滴鼻16周后制备COPD急性加重期大鼠模型。文文等[12]采用铜绿假单胞菌反复感染大鼠气道的方式可致大鼠产生COPD的病理学改变，以及蛋白水解酶诱导的COPD模型、基因调控COPD模型等[13]。考虑到吸烟是导致人类COPD和其他呼吸系统疾病发生发展的最重要因素之一[14]，烟熏联合LPS造模方法符合人类COPD病理变化，而单纯LPS滴入诱导的COPD模型是在短时间内造成肺及气管的损伤，相较于LPS联合烟熏制备的COPD大鼠模型，该模型可作为单纯因素疾病模型，对于研究COPD大鼠证候变化和机制区别具有重要的对比意义；另外气虚证多存在于COPD稳定期，细菌感染型建立的动物模型多处于COPD急性加重期[15]。因此，本实验中我们选择单纯滴入LPS和LPS滴入联合烟熏两种COPD疾病造模模型，动态观察12周，研究COPD大鼠模型疾病发生发展及证侯变化，通过对比两组大鼠第12周病理结果和肺功能发现两种造模方法在第12周均可以建立COPD大鼠模型，LPS联合烟熏组模型较LPS组更为典型。基于本课题组前期对血瘀证动物模型的研究经验[16-17]和临床上COPD气虚证的诊断标准和指标，课题组制作了COPD气虚证大鼠模型的等效指标转换表和宏观表征采集表，并对COPD其它证型的判断和鉴别制定了标准。在中医理论中，慢阻肺气虚证主要包括肺气虚、肺脾气虚和肺肾气虚，课题组将三种证候的共同症状归纳为主症和次症，主症包括神疲乏力、气短懒言、喘息和动辄加重；次症包括恶风自汗、舌淡苔白或有齿痕，脉沉虚。通过实验过程中对大鼠实际情况的观察，将气虚证共同症状等效转换为呼吸频率、呼吸幅度、自主活动、体重变化、抓取反抗、抓力测试、旷场实验行进总距离和平均速率等实际可观察的指标，满足等效指标三种及以上的情况，即认为气虚证成立，以判断病证结合模型是否建立成功。通过对各组大鼠12周各项数据结果分析发现：LPS联合烟熏组在第8周时，体重、旷场和抓力测试结果较空白组和LPS组都有明显的气虚证特征性改变；宏观表征采集表结果显示LPS联合烟熏组大鼠不仅有活动量和体质量增幅的减少，而且表现出蜷缩拱背、行动迟缓、神疲乏力、抓取反抗无力、毛失光泽、发黄、易脱落，偶可闻及呼吸道痰鸣音等表现，这些表现很大程度上符合中医理论对于气虚证的定义。到第12周时，这些症状更加明显，结合肺功能和HE染色结果，我们可以判断LPS联合烟熏组的大鼠模型不仅有COPD的病理表现，而且兼具气虚证的中医证型表现。
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性阻塞性肺疾病的发病机制研究进展[J]. 李锋,周新. 中国呼吸与危重监护杂志. 2019(01)
[2]重视慢性阻塞性肺疾病的预防与早期诊断[J]. 柳涛,杨汀,王辰. 协和医学杂志. 2019(01)
[3]线粒体融合与分裂的分子机制及相关疾病的研究进展[J]. 黄凯欣,熊艳,郑乐葳,叶啟发. 武汉大学学报(医学版). 2019(02)
[4]慢阻肺骨骼肌功能障碍的表现及影响因素[J]. 苏剑清,李培君,吴卫兵. 临床肺科杂志. 2018(12)
[5]慢性阻塞性肺疾病动物模型研究进展[J]. 蒋超文,陈琰,王斌. 中华肺部疾病杂志(电子版). 2018(04)
[6]基于“劳则气耗”理论研究气虚证动物模型的建立方法[J]. 陈进成,刘建勋,林成仁,任钧国,李磊,郭浩. 中国中药杂志. 2018(11)
[7]不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病患者病情及线粒体功能的影响[J]. 张少华,徐丹,闫雪娇,金晶,荆晶,姜敏,李争,高振,李风森. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(03)
[8]单因素诱导的慢性阻塞性肺疾病动物模型研究进展[J]. 李竹英,田春燕,高风丽. 中国中医急症. 2018(03)
[9]慢性心力衰竭心气虚证与线粒体能量代谢的关系探讨[J]. 陆璇,徐强. 光明中医. 2017(04)
[10]线粒体的融合、分裂与炎症反应研究进展[J]. 李香云,余剑波. 中国病理生理杂志. 2016(12)
本文编号：3065801
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3065801.html
