靶向IL-4及IL-13免疫调控对小鼠乳腺癌生长及转移的影响

发布时间：2021-05-12 07:29

　　背景:Th2细胞及其细胞因子在肿瘤发生发展中具有重要作用。IL-4及IL-13是重要的Th2型细胞因子,可以促进调节性T细胞（Treg）、骨髓来源免疫抑制细胞（MDSC）及肿瘤相关巨噬细胞（TAM）向肿瘤部位的浸润,下调Th1型反应及细胞毒性T淋巴细胞（CTL）抗肿瘤免疫应答,促进肿瘤免疫抑制微环境的形成。因此,靶向IL-4、IL-13具有改善肿瘤免疫抑制微环境,促进抗肿瘤效应细胞的产生、浸润及功能发挥,增强抗肿瘤免疫应答的潜力。肿瘤具备异质性,其抗原多变,限制了针对肿瘤特异抗原的疫苗研发及其取得显著临床效果。化疗是肿瘤临床治疗的常用手段,化疗药物可直接杀伤肿瘤细胞并释放大量肿瘤抗原,并且可能诱导肿瘤细胞免疫原性死亡,可激发机体针对多重肿瘤抗原产生抗肿瘤细胞免疫应答,但这一免疫效应往往受限于肿瘤免疫抑制机制的影响。目的:利用小鼠乳腺肿瘤模型,旨在探讨靶向IL-4及IL-13主动免疫对肿瘤生长、转移及免疫应答的调控潜能,同时探讨其与化疗药物杀伤肿瘤及诱导肿瘤细胞免疫原性死亡这一效应可能的协同作用。研究将有助于揭示IL-4与IL-13在肿瘤中的角色,并为肿瘤免疫治疗提供新的策略。方法:本研... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1. 研究背景
        1.1 肿瘤微环境
        1.2 Th1/Th2平衡
        1.3 IL-4和IL-13的功能
        1.4 病毒样颗粒和抗细胞因子疫苗
        1.5 肿瘤免疫原性死亡
    2. 研究内容、目的及意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料与试剂
        2.1.1 质粒、菌株及细胞株
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 酶、抗体和引物
        2.1.5 相关化学试剂及实验耗材
        2.1.6 相关仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 重组质粒HBcAg-IL-4/IL13及HBcAg-IL13/ILA构建
        2.2.2 重组质粒诱导表达
        2.2.3 重组蛋白病毒样颗粒的纯化
        2.2.4 病毒样颗粒(VLPs)的鉴定
        2.2.5 蛋白质定量
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 4T1肿瘤细胞的培养
        2.2.8 小鼠肿瘤模型的建立
            2.2.8.1 小鼠4T1原位乳腺癌模型建立
            2.2.8.2 小鼠4T1乳腺痛移模型建立
        2.2.9 病毒样颗粒免疫效果评价实验
        2.2.10 小鼠肺灌洗液的获取、肺部浸润细胞的计数和肺部染色
        2.2.11 血清IgG1和IgG2a的检测
        2.2.12 血清中特异的IgG抗体水平检测及抗体滴度的测定
        2.2.13 分离小鼠脾脏淋巴细胞
        2.2.14 ELISA检测细胞因子的表达
        2.2.15 流式细胞术检测CTL细胞水平
        2.2.16 流式细胞术检测Th1细胞水平
        2.2.17 流式细胞术检测Th2细胞水平
        2.2.18 流式细胞术检测Treg细胞水平
        2.2.19 流式细胞术检测MDSCs细胞水平
        2.2.20 肿瘤组织qPCR检测
        2.2.21 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 重组质粒pHBcAg-IL-4/IL-13及pHBcAg-IL-13/IL-4构建
    3.2 重组蛋白HBcAg-IL-4/IL-13及HBcAg-IL-13/IL-4的诱导表达与可溶性鉴定
    3.3 重组蛋白的纯化
        3.3.1 硫酸铵盐析法初步纯化
        3.3.2 蔗糖密度梯度离心进一步纯化VLPs蛋白
    3.4 病毒样颗粒的鉴定
        3.4.1 HPLC分析病毒样颗粒纯度
        3.4.2 电镜鉴定病毒样颗粒
    3.5 Western Blot
    3.6 重组VLPs免疫小鼠后抗体水平检测
    3.7 抗IL-4及IL-13预防性免疫对小鼠乳腺癌转移模型的干预
        3.7.1 单独免疫HBcAg-IL-13或HBcAg-IL-4对小鼠乳腺癌转移的干预
        3.7.2 同时免疫HBcAg-IL-13和HBcAg-IL-4对小鼠乳腺癌转移的干预
    3.8 靶向IL-4与IL-13免疫对小鼠乳腺癌原位肿瘤生长的影响
        3.8.1 免疫HBcAg-IL-13对小鼠乳腺癌原位肿瘤的干预
        3.8.2 同时免疫HBcAg-IL-13和HBcAg-IL-4对小鼠乳腺癌转移的干预
    3.9 HBcAg-IL-4与HBcAg-IL-13 VLPs主动免疫联合米托蒽醌的抗肿瘤效应
结论
讨论
展望
参考文献
附录
    附录Ⅰ 英文缩写词
    附录Ⅱ 主要溶液的配制
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]乙肝病毒核心抗原作为载体用于病毒样颗粒疫苗研究的主要进展[J]. 杨星钰,薄洪,舒跃龙.  病毒学报. 2012(03)



本文编号：3183010