森林脑炎病毒包膜E蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性初步评价

发布时间：2021-05-12 07:55

　　目的原核表达及纯化森林脑炎病毒（tick-bome encephalitisvirus,TBEV）包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E. coli BL21（DE3）,挑取阳性克隆,扩增后经终浓度为0. 1 mmol/L的IPTG诱导,表达产物经12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。将鉴定正确的重组蛋白采用镍柱亲和法纯化,铝佐剂吸附后,经小鼠左侧腹腔注射,0. 5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法测定小鼠血清抗体水平。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-TBEV E构建正确。表达产物相对分子质量约55 000,主要以包涵体形式表达,表达量约22. 3%,且可与小鼠抗TBEV血清发生特异反应,纯化后纯度达90%。末次免疫后21 d,小鼠血清抗体效价达最高,为1∶6 400。结论经原核表达系统成功表达并纯化了TBEV E蛋白,该蛋白具有较好... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(05)CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒、菌株及病毒
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 实验动物
    1.4 引物设计及合成
    1.5 TBEV E蛋白基因的扩增
    1.6 重组表达质粒的构建
    1.7 重组蛋白的诱导表达
    1.8 重组蛋白的Western blot鉴定
    1.9 重组蛋白的纯化
    1.1 0 动物分组及给药
    1.1 1 抗体水平测定
2 结果
    2.1 目的基因的鉴定
    2.2 重组质粒的鉴定
    2.3 重组蛋白的鉴定
        2.3.1 SDS-PAGE分析
        2.3.2 Western blot分析
    2.4 纯化产物的鉴定
    2.5 重组蛋白的免疫原性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]2010～2016年吉林省森林脑炎流行特征分析[J]. 邓立权,沈博,李亚明.  中国生物制品学杂志. 2017(10)
[2]Tick-borne encephalitis: A review of epidemiology, clinical characteristics, and management[J]. Petra Bogovic,Franc Strle.  World Journal of Clinical Cases. 2015(05)



本文编号：3183049