包虫囊液体外诱导小鼠脾脏淋巴细胞TLR2和IDO表达的实验研究
发布时间：2021-06-12 05:11
目的研究细粒棘球蚴囊液对体外培养小鼠脾脏淋巴细胞TLR2和IDO表达的影响。方法制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液,接种于24孔培养板中进行培养,用不同浓度比的包虫囊液（1∶10、1∶100）进行干预。分别在干预后12、24、36 h收集2份细胞及1份细胞培养上清,一份细胞用于Trizol法提取总RNA,通过实时荧光定量PCR检测TLR2、IDO、IL-5的mRNA相对表达水平,另一份细胞采用Western blot方法检测TLR2、IDO蛋白。细胞上清中的IL-6、TGF-β含量采用ELISA法检测。对小鼠脾脏淋巴细胞中IDO与TLR2 mRNA的表达进行线性相关分析。结果实时荧光定量PCR检测HCF为1∶10、1∶100时均可上调小鼠脾脏淋巴细胞TLR2、IDO、IL-5 mRNA的表达,其中1∶100稀释的HCF在24h时分别为0.282±0.144、0.218±0.036、0.648±0.148,与对照组0.006±0.003、0.002±0.000、0.008±0.001比较差异均有统计学意义（P<0.05）;Western blot检测TLR2和IDO的表达均可被HCF上调,且...
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(06)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
小鼠脾脏淋巴细胞TLR2、IDO、IL-5 mRNA相对表达量
ELISA检测小鼠脾脏淋巴细胞上清中的IL-6、TGF-β,结果如图3。其中IL-6在阴性对照组、LPS组、1∶100 HCF组和1∶10 HCF组分别为(67.328±5.839) pg/ml、(248.293±21.350) pg/ml、(296.495±12.495) pg/ml和(183.915±7.473) pg/ml,TGF-β分别为(324.200±8.065) pg/ml、(374.600±9.365) pg/ml、(449.700±5.350) pg/ml和(419.800± 8.875) pg/ml。低浓度和高浓度HCF对体外培养小鼠脾脏淋巴细胞干预24 h,IL-6和TGF-β水平与阴性组相比差异均有统计学意义(低浓度HCF下,IL-6:t=16.62,P<0.01,TGF-β:t=12.97,P<0.01;高浓度HCF下,IL-6:t=12.29,P<0.01,TGF-β:t=7.98,P<0.05),以低浓度HCF干预下增高更显著。在低浓度、高浓度HCF刺激下的细胞上清IL-6水平差异有统计学意义(t=7.73,P<0.05)。
表5 不同时间点TLR2及IDO蛋白的灰度值 ( x ˉ ±s) Table 5 The gray-scale scanning of TLR2 and IDO proteins at different time points 组别 Group 12 h 24 h 36 h TLR 2 阴性对照组 0.171±0.016 0.075±0.006 0.110±0.007 LPS组 0.416±0.046 0.277±0.026 0.577±0.066 1∶100 HCF组 0.398±0.043 0.397±0.020 0.828±0.118 1∶10 HCF组 0.350±0.025 0.322±0.008 0.977±0.019 IDO 阴性对照组 0.586±0.093 0.332±0.022 0.847±0.083 LPS组 0.344±0.126 0.906±0.083 0.561±0.045 1∶100 HCF组 0.670±0.064 0.707±0.093 1.173±0.106 1∶10 HCF组 0.590±0.037 0.614±0.020 0.377±0.050当HCF浓度为1∶100、1∶10时,均可检测出TLR2和IDO蛋白的表达。在1∶100HCF与1∶10HCF干预下,细胞TLR2及IDO均高表达,且在低浓度HCF刺激下,TLR2和IDO表达量随刺激时间延长而增加。经蛋白灰度扫描,36 h时TLR2及IDO的表达量较12 h时分别上调2.1倍和1.8倍;高浓度HCF刺激下,TLR2的表达量随刺激时间延长而增加,36 h时较12 h上调2.8倍,而IDO的表达量随刺激时间延长而减少,36 h时下调36%。
【参考文献】：
期刊论文
[1]调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达[J]. 单骄宇,热比亚·努力,李瑞,林仁勇,温浩,李海涛. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[2]HBV感染肝癌患者外周血Treg细胞和IDO表达的相关性[J]. 杨峻,王前,石青峰,苗海霞. 国际检验医学杂志. 2018(03)
[3]IDO在肿瘤中作用的研究进展[J]. 王蕾,刘小倩,初晓霞,徐俊卿. 中国肿瘤. 2018(03)
[4]细粒棘球绦虫感染宿主免疫应答特征[J]. 曹建平,王莹,潘伟,张璟,沈玉娟. 中国动物保健. 2017(07)
[5]IL-18及IL-18结合蛋白、IFN-γ等血清炎性介质在囊型包虫病致Th1/Th2细胞偏移中的意义[J]. 郭忠帅,张峰波,向阳,林雨薇,庞楠楠,赵慧,张佳,马秀敏,丁剑冰. 新疆医科大学学报. 2016(04)
[6]Toll样受体2和4信号通路在炎症治疗中的作用和意义[J]. 詹雪灵,高杰,吴补领. 国际口腔医学杂志. 2014(03)
[7]不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究[J]. 单骄宇,李海涛,李春燕,肖晋,李亮,张雪,林仁勇,温浩. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(03)
[8]原头蚴及囊液促体外培养小鼠脾细胞TGF-β表达的研究[J]. 陈小林,印双红,吴向未,陈雪玲. 中国病原生物学杂志. 2013(06)
[9]细粒棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的动态观察[J]. 单骄宇,李海涛,吐尔洪江·吐逊,肖晋,李亮,林仁勇,温浩. 中国病原生物学杂志. 2012(09)
[10]IDO调节Th1/Th2平衡的研究进展[J]. 张文颖,姜斌. 中华微生物学和免疫学杂志. 2009 (10)
博士论文
[1]细粒棘球蚴致树突状细胞免疫耐受的机制研究[D]. 单骄宇.新疆医科大学 2011
本文编号：3226014
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(06)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
小鼠脾脏淋巴细胞TLR2、IDO、IL-5 mRNA相对表达量
ELISA检测小鼠脾脏淋巴细胞上清中的IL-6、TGF-β,结果如图3。其中IL-6在阴性对照组、LPS组、1∶100 HCF组和1∶10 HCF组分别为(67.328±5.839) pg/ml、(248.293±21.350) pg/ml、(296.495±12.495) pg/ml和(183.915±7.473) pg/ml,TGF-β分别为(324.200±8.065) pg/ml、(374.600±9.365) pg/ml、(449.700±5.350) pg/ml和(419.800± 8.875) pg/ml。低浓度和高浓度HCF对体外培养小鼠脾脏淋巴细胞干预24 h,IL-6和TGF-β水平与阴性组相比差异均有统计学意义(低浓度HCF下,IL-6:t=16.62,P<0.01,TGF-β:t=12.97,P<0.01;高浓度HCF下,IL-6:t=12.29,P<0.01,TGF-β:t=7.98,P<0.05),以低浓度HCF干预下增高更显著。在低浓度、高浓度HCF刺激下的细胞上清IL-6水平差异有统计学意义(t=7.73,P<0.05)。
表5 不同时间点TLR2及IDO蛋白的灰度值 ( x ˉ ±s) Table 5 The gray-scale scanning of TLR2 and IDO proteins at different time points 组别 Group 12 h 24 h 36 h TLR 2 阴性对照组 0.171±0.016 0.075±0.006 0.110±0.007 LPS组 0.416±0.046 0.277±0.026 0.577±0.066 1∶100 HCF组 0.398±0.043 0.397±0.020 0.828±0.118 1∶10 HCF组 0.350±0.025 0.322±0.008 0.977±0.019 IDO 阴性对照组 0.586±0.093 0.332±0.022 0.847±0.083 LPS组 0.344±0.126 0.906±0.083 0.561±0.045 1∶100 HCF组 0.670±0.064 0.707±0.093 1.173±0.106 1∶10 HCF组 0.590±0.037 0.614±0.020 0.377±0.050当HCF浓度为1∶100、1∶10时,均可检测出TLR2和IDO蛋白的表达。在1∶100HCF与1∶10HCF干预下,细胞TLR2及IDO均高表达,且在低浓度HCF刺激下,TLR2和IDO表达量随刺激时间延长而增加。经蛋白灰度扫描,36 h时TLR2及IDO的表达量较12 h时分别上调2.1倍和1.8倍;高浓度HCF刺激下,TLR2的表达量随刺激时间延长而增加,36 h时较12 h上调2.8倍,而IDO的表达量随刺激时间延长而减少,36 h时下调36%。
【参考文献】：
期刊论文
[1]调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达[J]. 单骄宇,热比亚·努力,李瑞,林仁勇,温浩,李海涛. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[2]HBV感染肝癌患者外周血Treg细胞和IDO表达的相关性[J]. 杨峻,王前,石青峰,苗海霞. 国际检验医学杂志. 2018(03)
[3]IDO在肿瘤中作用的研究进展[J]. 王蕾,刘小倩,初晓霞,徐俊卿. 中国肿瘤. 2018(03)
[4]细粒棘球绦虫感染宿主免疫应答特征[J]. 曹建平,王莹,潘伟,张璟,沈玉娟. 中国动物保健. 2017(07)
[5]IL-18及IL-18结合蛋白、IFN-γ等血清炎性介质在囊型包虫病致Th1/Th2细胞偏移中的意义[J]. 郭忠帅,张峰波,向阳,林雨薇,庞楠楠,赵慧,张佳,马秀敏,丁剑冰. 新疆医科大学学报. 2016(04)
[6]Toll样受体2和4信号通路在炎症治疗中的作用和意义[J]. 詹雪灵,高杰,吴补领. 国际口腔医学杂志. 2014(03)
[7]不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究[J]. 单骄宇,李海涛,李春燕,肖晋,李亮,张雪,林仁勇,温浩. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(03)
[8]原头蚴及囊液促体外培养小鼠脾细胞TGF-β表达的研究[J]. 陈小林,印双红,吴向未,陈雪玲. 中国病原生物学杂志. 2013(06)
[9]细粒棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的动态观察[J]. 单骄宇,李海涛,吐尔洪江·吐逊,肖晋,李亮,林仁勇,温浩. 中国病原生物学杂志. 2012(09)
[10]IDO调节Th1/Th2平衡的研究进展[J]. 张文颖,姜斌. 中华微生物学和免疫学杂志. 2009 (10)
博士论文
[1]细粒棘球蚴致树突状细胞免疫耐受的机制研究[D]. 单骄宇.新疆医科大学 2011
本文编号：3226014
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3226014.html
