长爪沙鼠NAFLD模型中CIP4基因的表达及与β-catenin蛋白相互作用的免疫共沉淀验证
发布时间：2021-06-21 08:29
目的获得长爪沙鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）模型中CDC42作用蛋白4（CIP4）基因的表达规律及是否受β连环蛋白（β-catenin）调控的证据。方法 3月龄雄性长爪沙鼠30只采用随机数字表法分为正常组6只和模型组24只,模型组按饲喂高脂饲料的时间不同分为2周组、4周组、8周组、12周组,每组6只。按组采集肝脏大叶标本4份,HE染色及Masson染色检测肝脏的病理变化,荧光定量PCR（q PCR）法检测CIP4 m RNA相对表达量,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测CIP4蛋白相对表达量,免疫共沉淀（Co IP）验证CIP4与β-catenin的相互作用。结果肝病理学检测结果显示,随着造模时间的延长,模型组沙鼠均出现肝脏脂肪病变（单纯脂肪肝,2～4周造模,S0～S1）,脂肪性肝炎（4～8周造模,脂堆积形成肝细胞的肿胀,坏死和空泡,少量纤维化出现,S1～S2）,肝纤维化（8～12周造模,S2～S3）,部分有假小叶形成。q PCR和Western blot结果显示,随着造模时间延长,CIP4 m RNA和蛋白相对表达量均下降。模型组被Co IP下来的CIP4蛋白明显下降...
【文章来源】：浙江医学. 2020,42(10)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量比较（a:CIP4基因的熔解曲线；b:CIP4基因的扩增曲线；c：内参GAPDH的熔解曲线；d：内参GAPDH的扩增曲线；e：各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量，与Z组比较，*P<0.05)
图2 各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量比较（a:CIP4基因的熔解曲线；b:CIP4基因的扩增曲线；c：内参GAPDH的熔解曲线；d：内参GAPDH的扩增曲线；e：各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量，与Z组比较，*P<0.05)2.4 CIP4与β-catenin的相互作用
最新的肝纤维化相关研究进展认为促纤维化因子（TGF-β1、NF-κB、肾素、血管紧张素等）上调了细胞外基质基因表达，同时抑纤维化因子IFN-γ致促胶原降解基因表达下降，致胶原过量堆积而致纤维化[10]，以上理论中关于CIP4的作用尚是空白。抑制不同细胞中CIP4基因后导致细胞多种分化结果，其中一种是纤维化，这说明调节该基因可以用来研究肝纤维化的发生机制。CIP4是PCH家族的一个成员，具有与磷脂酰丝氨酸结合的FER类似区和一个SH3区域。该基因的转录激活/抑制主要取决于其3个结构域，一个是TR-RXR/PPAR-RXR二聚体的结合区（FCH区），一个是CDC42结合的HR1区，另一个是SH3区，即富含脯氨酸，可与下游特定泛素化的靶蛋白结合[11]。肿瘤细胞实验和肾纤维化研究表明CIP4可通过SH3区的脯氨酸与β-catenin结合，而β-catenin（第654位点酪氨酸残基）磷酸化易被泛素化降解，鉴于β-catenin是一个经典的信号转导蛋白，因此可能通过与CIP4结合而对CIP4表达起调节作用[6,12]。本研究中CoIP法结果表明，M组中CIP4与β-catenin之间结合程度小于Z组，而且可能随着肝纤维化的发展结合程度越来越小。结合该基因在其他领域[13-14]的研究进展推断随着NAFLD病程的进展，CIP4内吞作用的破坏导致β-catenin出现核转位，细胞极性发生变化，致使肝细胞黏附连接复合物（上皮细胞转分化过程中的一种细胞形态）的完整性不能维持，从而促进肝细胞转分化过程，其结果是肝实质逐渐为肝星状细胞取代，肝脏逐渐纤维化，这时肝脏外观上看是从柔软趋向硬化的过程。综上所述，长爪沙鼠NAFLD模型中CIP4随着造模时间的延长，呈现出低表达的趋势，可能与炎症及纤维化有关且受β-catenin的调控。
【参考文献】：
期刊论文
[1]长爪沙鼠肝脏基因组DNA甲基化水平检测[J]. 王志远,刘月环. 实验动物与比较医学. 2018(01)
[2]长爪沙鼠NAFLD模型的建立及其遗传学的研究[J]. 刘月环,吴旧生,应华忠,徐承富,石巧娟,余陈欢. 中国比较医学杂志. 2017(05)
硕士论文
[1]CIP4在肾脏纤维化中的表达及其与β-catenin的关系[D]. 张亚敏.华中科技大学 2011
本文编号：3240345
【文章来源】：浙江医学. 2020,42(10)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量比较（a:CIP4基因的熔解曲线；b:CIP4基因的扩增曲线；c：内参GAPDH的熔解曲线；d：内参GAPDH的扩增曲线；e：各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量，与Z组比较，*P<0.05)
图2 各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量比较（a:CIP4基因的熔解曲线；b:CIP4基因的扩增曲线；c：内参GAPDH的熔解曲线；d：内参GAPDH的扩增曲线；e：各组沙鼠CIP4 m RNA相对表达量，与Z组比较，*P<0.05)2.4 CIP4与β-catenin的相互作用
最新的肝纤维化相关研究进展认为促纤维化因子（TGF-β1、NF-κB、肾素、血管紧张素等）上调了细胞外基质基因表达，同时抑纤维化因子IFN-γ致促胶原降解基因表达下降，致胶原过量堆积而致纤维化[10]，以上理论中关于CIP4的作用尚是空白。抑制不同细胞中CIP4基因后导致细胞多种分化结果，其中一种是纤维化，这说明调节该基因可以用来研究肝纤维化的发生机制。CIP4是PCH家族的一个成员，具有与磷脂酰丝氨酸结合的FER类似区和一个SH3区域。该基因的转录激活/抑制主要取决于其3个结构域，一个是TR-RXR/PPAR-RXR二聚体的结合区（FCH区），一个是CDC42结合的HR1区，另一个是SH3区，即富含脯氨酸，可与下游特定泛素化的靶蛋白结合[11]。肿瘤细胞实验和肾纤维化研究表明CIP4可通过SH3区的脯氨酸与β-catenin结合，而β-catenin（第654位点酪氨酸残基）磷酸化易被泛素化降解，鉴于β-catenin是一个经典的信号转导蛋白，因此可能通过与CIP4结合而对CIP4表达起调节作用[6,12]。本研究中CoIP法结果表明，M组中CIP4与β-catenin之间结合程度小于Z组，而且可能随着肝纤维化的发展结合程度越来越小。结合该基因在其他领域[13-14]的研究进展推断随着NAFLD病程的进展，CIP4内吞作用的破坏导致β-catenin出现核转位，细胞极性发生变化，致使肝细胞黏附连接复合物（上皮细胞转分化过程中的一种细胞形态）的完整性不能维持，从而促进肝细胞转分化过程，其结果是肝实质逐渐为肝星状细胞取代，肝脏逐渐纤维化，这时肝脏外观上看是从柔软趋向硬化的过程。综上所述，长爪沙鼠NAFLD模型中CIP4随着造模时间的延长，呈现出低表达的趋势，可能与炎症及纤维化有关且受β-catenin的调控。
【参考文献】：
期刊论文
[1]长爪沙鼠肝脏基因组DNA甲基化水平检测[J]. 王志远,刘月环. 实验动物与比较医学. 2018(01)
[2]长爪沙鼠NAFLD模型的建立及其遗传学的研究[J]. 刘月环,吴旧生,应华忠,徐承富,石巧娟,余陈欢. 中国比较医学杂志. 2017(05)
硕士论文
[1]CIP4在肾脏纤维化中的表达及其与β-catenin的关系[D]. 张亚敏.华中科技大学 2011
本文编号：3240345
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