金黄色葡萄球菌SarA、IcaA及其融合基因的DNA疫苗构建及在小鼠免疫应答中的初步研究

发布时间：2023-03-05 20:48

　　目的:探究SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG(Azami Green用AG表示)融合基因的DNA疫苗及对小鼠免疫应答的影响。方法:以金黄色葡萄球菌基因组为模板,通过PCR等反应进行SarA-AG、Ica A-AG及IcaA-SarA-AG融合基因DNA疫苗的构建,将DNA疫苗转染至HeLa细胞,荧光显微镜下观察DNA疫苗的瞬时表达情况,将转染成功2周后的细胞进行基因组提取,PCR检测质粒在染色体上的整合情况。使用AG、SarA-AG(A组)、Ica A-AG(B组)及Ica A-SarA-AG(C组) 4组免疫BALB/c小鼠,应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中IgG抗体、IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ及TNF-α的分泌情况。结果:成功构建SarA-AG、IcaA-AG及Ica A-SarA-AG融合基因DNA疫苗,荧光显微镜下观察DNA疫苗转染情况,结果显示有绿色荧光。提取细胞基因组PCR检测结果显示未出现目的基因条带。免疫小鼠后,A、B、C组均能够诱导小鼠产生较高水平的IgG抗体。与空白组及空载体AG组相比,A、B组均能分泌较高水平的IL-2(P ...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 载体、细胞株及实验动物
        1.1.2 主要试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 PCR扩增并回收目的片段与T载体连接
        1.2.4 T载体重组质粒连接、菌液PCR双酶切鉴定
        1.2.5 SarA-AG、IcaA-AG、IcaA-SarA-AG DNA疫苗的构建及细胞转染
2 结果与分析
    2.1 目的基因片段的获取
    2.2 目的基因的T载体克隆、鉴定及测序
    2.3 Sar A-AG、Ica A-AG、Ica A-Sar A-AG DNA疫苗的构建
    2.4 细胞转染结果
    2.5 PCR检测DNA疫苗安全性
    2.6 DNA疫苗免疫小鼠血清IgG抗体水平检测
    2.7 DNA疫苗免疫小鼠细胞因子的分泌情况
3 讨论



本文编号：3756889