利用CRISPR/Cas9技术构建Mex3c基因缺陷小鼠模型

发布时间：2023-03-08 08:08

　　目的利用CRISPR/Cas9技术敲除FVB小鼠Mex3c基因,为进行相关研究提供Mex3c基因缺陷小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对性设计Mex3c基因1～2外显子sgRNA,将小鼠mex3c基因的sgRNA和Cas9 mRNA共注射到受精卵中,产生目标基因敲除子代,待小鼠出生3周后剪鼠尾提取DNA并进行PCR鉴定,所获F0代杂合小鼠继续与野生型小鼠合笼繁殖获取F1、F2代小鼠,剪取组织提取DNA鉴定分离杂合体小鼠。结果获得了6只Mex3c基因杂合突变的F0代小鼠,F1代共20只雌性杂合小鼠,F2代24只雌性杂合小鼠,能够稳定遗传Mex3c缺陷基因。基因组测序结果显示获得正确敲除的杂合子。结论成功获得Mex3c基因缺陷的FVB小鼠,为研究不同能量代谢条件下的子代鼠胚神经管发生发育提供了重要工具。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 Mex3c基因序列分析和基因敲除靶点设计合成
    1.3 gRNA的脱靶效应分析及CRISPR/CaS 9诱导突变的gRNA检测
    1.4 小鼠受精卵体外显微注射
    1.5 小鼠基因型鉴定
2 结 果
    2.1 小鼠Mex3c基因gRNA设计及其表达载体的构建
    2.2 gRNA脱靶效应分析结果
    2.3 Mex3c+/-小鼠基因型的鉴定
3 讨 论



本文编号：3757946