H5N1型禽流感病毒NS1相互作用蛋白的筛选及验证

发布时间：2025-03-30 02:37

　　禽流感病毒NS1蛋白在流感病毒感染宿主细胞后大量表达,但在成熟病毒粒子中并不存在,因此被称为非结构蛋白。NS1在流感病毒感染宿主细胞的过程中发挥着十分重要的作用,主要包括抵抗宿主的免疫应答,阻止干扰素生成,进一步拮抗干扰素形成的病毒防线等。此外NS1还是禽流感病毒中重要的毒力因子,其关键位点能够影响流感病毒的致病性。NS1还能够调节mRNA的剪切和核-质输出,这些对病毒感染和复制大有帮助。NS1蛋白是禽流感病毒中关键的致病因子,能够与多种蛋白发生相互作用,改变宿主蛋白的胞内分布,进一步调节病毒的毒力和致病性。为了进一步研究NS1蛋白在禽流感病毒复制以及致病过程中的作用,本研究以H5N1型禽流感病毒的NS1蛋白为诱饵,构建了带有GST标签的重组质粒,初步优化表达条件,经纯化得到较高纯度的融合蛋白。通过GST-Pull down技术,以GST蛋白为对照,在人肺腺癌A549细胞系中筛选出更多与NS1相互作用的蛋白。为了验证潜在的互作蛋白与NS1之间的相互作用,原核表达两种蛋白,利用ELISA技术验证两蛋白间的互作;真核表达两种蛋白,利用Co-IP技术进一步验证两蛋白的互作。实验结果表明:与GS...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 禽流感病毒NS1 蛋白研究进展
        1.1.1 禽流感病毒简介
        1.1.2 非结构蛋白NS1 简介
        1.1.3 NS1 蛋白与细胞凋亡
        1.1.4 NS1 互作宿主蛋白
    1.2 α-actinin4 蛋白简介
        1.2.1 α-actinin4 的分子特征以及组织分布
        1.2.2 α-actinin4 蛋白的生物学功能
        1.2.3 α-actinin4 在禽流感疾病中的作用
    1.3 常用蛋白质互作研究方法
        1.3.1 酵母双杂交
        1.3.2 双分子荧光互补分析技术
        1.3.3 Pull down
        1.3.4 免疫共沉淀
    1.4 研究目的与意义
    1.5 研究技术路线
第2章 NS1 互作蛋白的筛选
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验设备及材料
        2.1.2 构建GST标签表达载体实验方法
        2.1.3 融合蛋白的表达及亲和纯化实验方法
        2.1.4 A549 细胞的培养及裂解实验方法
        2.1.5 Pull Down互作蛋白及质谱鉴定实验方法
    2.2 结果分析
        2.2.1 构建GST标签载体结果分析
        2.2.2 融合蛋白表达及亲和纯化结果分析
        2.2.3 Pull down互作蛋白结果分析
    2.3 讨论
    2.4 本章小结
第3章 NS1 蛋白互作的验证
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验设备及材料
        3.1.2 ELISA验证蛋白互作实验方法
        3.1.3 Co-IP验证蛋白互作实验方法
    3.2 实验结果分析
        3.2.1 ELISA验证蛋白互作结果分析
        3.2.2 Co-IP验证蛋白互作结果分析
    3.3 讨论
    3.4 本章小结
第4章 总结与展望
    4.1 总结
    4.2 展望
参考文献
致谢
附录 1 主要仪器设备表
附录 2 主要试剂表
附录 3
附录 4
攻读学位期间发表的学术论文情况



本文编号：4038053