TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

发布时间：2017-08-01 00:31

  本文关键词：TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

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【摘要】：目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接、热激、转化等亚克隆而构建成重组穿梭质粒。之后,应用限制性内切酶BglⅡ/SalⅠ,酶切含启动子和hTIMP1基因片段,再通过回收片段以及连接、热激等步骤亚克隆至pDC316-hTK1载体中,构建含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质粒。利用AdMax腺病毒Cre/loxP重组酶系统,将该质粒和骨架病毒质粒于293A细胞中同源重组包装产生双基因的重组腺病毒载体。采用Western blot测定在VSMCs中的表达。结果经PCR、双酶切和测序证实,重组病毒穿梭质粒pDC316-hTIMP1-EGFP和pDC316-hTK1-hTIMP1构建正确。在293A细胞里成功包装产生含双基因的重组腺病毒载体Ad5-hTK1-hTIMP1感染VSMCs后,hTK1和hTIMP1蛋白呈独立高表达,表达水平呈浓度依赖性增加。结论首次成功构建并包装了含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组腺病毒载体,目的蛋白在VSMCs中呈现独立高表达,为血管重构性疾病的多个功能基因治疗奠定初步实验室基础
【作者单位】： 福建医科大学省立临床医学院干部二科;福建省立医院老年医学研究室;福建省临床老年病研究所;
【关键词】： 组织激肽释放酶基因 基质金属蛋白酶组织抑制物基因 重组腺病毒载体 血管重构
【基金】：福建省自然科学基金(2011J01134,2013J01273)
【分类号】：R329
【正文快照】： iflLH'平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)被、iX'移以及细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)改变是血管损伤后冉狭窄、高血压、动n, ,,AW A恤n;3-脉粥样硬化核管重构的重要病理过程。mm善或逆转i:述病理过程是近年来15方治血管重塑的基因治疗领域的热点问题。

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本文编号：601823