过表达DNMT3B7质粒载体的构建及对293A细胞增殖的影响

发布时间：2017-08-25 20:11

  本文关键词：过表达DNMT3B7质粒载体的构建及对293A细胞增殖的影响

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【摘要】：目的构建DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的一种异构体3B7的真核质粒表达载体,在体外评价其对人胚肾细胞株293A增殖影响。方法据GenBank中人DNMT3B7 cDNA序列设计并合成特异性引物,以DNMT3B1为模板,利用高保真Taq酶,进行PCR技术扩增DNMT3B7,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中。将携带DNMT3B7基因的质粒pCMV-DNMT3B7及空质粒pCMV-2B转染293A细胞,通过G418筛选出稳定表达的细胞系,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布。同时检测p21蛋白表达情况。结果成功构建DNMT3B7的真核表达载体并筛选出稳定表达株,与转染空质粒组相比,稳定过表达DNMT3B7组293A细胞株增殖减慢(P0.01);过表达DNMT3B7的293A细胞S期细胞比例显著增多(P0.05)。p21 mRNA和蛋白表达增加(P0.05)。结论 DNMT3B7基因过表达可抑制293A细胞增殖,p21可能参与了这一过程的调节。
【作者单位】： 包头医学院生物医学研究中心;包头医学院基础医学院;包头医学院第二附属医院消化科;泰山医学院附属医院神经内科;丽水学院医学院;首都医科大学宣武医院神经内科;首都医科大学宣武医院
【关键词】： DNA甲基转移酶B A细胞 细胞增殖 p
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81060212,81160244,81360316) 中国博士后基金资助项目(20080430851) 内蒙古自然科学基金资助项目(2010BS1104) 内蒙古自治区高等学校科研项目资助课题(NJZY12221,NJZY12225,NJYT-13-A10)
【分类号】：R363
【正文快照】： 0引言细胞中表观遗传学变化主要包括DNA甲基化的变化以及组蛋白的修饰,DNA甲基化的变化包括高甲基化和低甲基化,DNA高甲基化伴随基因转录失活而DNA低甲基化伴随着转录的开放。异常的DNA甲基化是疾病发生的一个重要因素。真核生物中催化DNA发生甲基化的DNA甲基转移酶(DNAmethyl

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本文编号：738058