胸腺肽α1对T细胞亚群及其细胞因子影响的初步研究

发布时间：2017-08-26 01:35

  本文关键词：胸腺肽α1对T细胞亚群及其细胞因子影响的初步研究

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【摘要】：背景:自二十世纪,Goldstein在小牛胸腺中分离纯化得到胸腺肽α1,科学家对于胸腺肽α1的研究就从未止步。之后研究人员发现胸腺肽α1对免疫缺陷的患者具有免疫调节作用,从而使胸腺肽α1被广泛应用到临床中。直至今日,科学家仍然不断研究胸腺肽α1的临床疗效以及作用机制。目前胸腺肽α1作为免疫增强佐剂已被应用于临床治疗中,在肿瘤、AIDS、先天性免疫缺陷、呼吸窘迫综合征等方面具有显著作用。其可以通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡以及增强特异性抗癌作用来达到抑制肿瘤的作用。在慢性乙型肝炎患者胸腺肽α1可以通过影响先天免疫、淋巴细胞亚型、细胞因子分泌等来增强机体免疫力,从而达到临床治疗疾病的目的,然而其作用机制仍需进一步的研究。近些年,胸腺肽α1在慢性乙型肝炎患者中的疗效逐渐被学者所重视,临床体内实验表明胸腺肽α1作为佐剂具有延长治疗疗效,改善患者预后的作用,然而也有学者认为其对于慢性乙型肝炎患者治疗疗效并无明显的改善。因此,对于胸腺肽α1在慢性乙型肝炎预后方面的疗效仍然需要大量的研究数据来论证。目前胸腺肽α1对正常小鼠中脾脏淋巴细胞的影响在国内研究较少,其影响是否具有剂量依赖性也报道较少。尚未有国内学者报道胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞CD45RA、CD45RO的影响。通过本课题我们研究了胸腺肽α1对于正常小鼠以及慢性乙型肝炎患者淋巴细胞亚群与细胞因子的影响,初步探讨其作用机制,发现对于CD45RA、CD45RO的影响,对其在临床的应用具有很大意义。目的:本研究主要通过体外实验观察和比较胸腺肽α1对正常小鼠淋巴细胞以及慢性乙型肝炎患者外周血中T细胞亚群及细胞因子的影响。方法:本研究中动物体外实验选用清洁级雄鼠BALB/c(5周,18-22g),选取鼠脾淋巴细胞,将不添加药物组作为阴性对照组,加Con A组作为阳性对照组,加入不同浓度胸腺肽α1为实验组。通过流式分析、实时定量PCR,观察不同浓度下胸腺肽α1对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖与活化的影响以及对细胞因子IL-4,IFN-γ,IL-2,IL-10的影响。临床体外试验选取20例未经治疗的HBe Ag阳性慢性乙型肝炎患者,提取外周血淋巴细胞,实验组为加入Con A组、胸腺肽α1组,对照组为加入Con A组,分析两组CD4~+、CD8~+、CD4~+CD45RA~+、CD4~+CD45RO~+、CD4~+CD45RA~+CD45RO~+、CD8~+CD45RO~+、CD8~+CD45RA~+、CD8~+CD45RA~+CD45RO~+细胞比例,以及两组对IL-4与IFN-γ细胞因子的影响。数据结果采用SPSS20.0软件进行分析,两组对比用T检验,组间对比用F检验。结果:通过比较与观察发现,不同浓度的胸腺肽α1对正常小鼠脾淋巴细胞中CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的增殖与活化的影响不具有统计学意义(P0.05);胸腺肽α1可以增加正常小鼠脾淋巴细胞中IL-2的表达(P0.01),且在100-1000nmol/l时不具有浓度依赖性;胸腺肽α1可增加正常小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达水平(P0.01),且在100nmol/l以内具有浓度依赖性;可抑制正常小鼠脾淋巴细胞中IL-4的表达水平(P0.01),且在50-500nmol/l时不具有浓度依赖性;可以抑制正常小鼠脾淋巴细胞中IL-10的表达水平(P0.01),且在50-500nmol/l时不具有浓度依赖性。胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞中CD4~+、CD4~+CD45RA~+、CD4~+CD45RO~+、CD4~+CD45RA~+CD45RO~+、CD8~+CD45RO~+、CD8~+CD45RA~+、CD8~+CD45RA~+CD45RO~+细胞的比例不具有影响(P0.05),但可增加CD8~+T淋巴细胞的比例(P0.05),且可增加IFN-γ、抑制IL-4的表达水平(P0.01),这一机制可能与其对慢性乙型肝炎患者的治疗作用有关。结论:胸腺肽α1对正常小鼠淋巴细胞Th2分泌的IL-4、IL-10细胞因子具有抑制作用,对Th1分泌的IFN-γ、IL-2具有促进作用,而对于CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的增殖与活化不具有影响,说明胸腺肽α1对于正常小鼠淋巴细胞的亚群具有一定的影响。胸腺肽α1可增加CD8~+T淋巴细胞的比例,增加IFN-γ以及降低IL-4的表达,说明这一作用机制,与其对于慢性乙型肝炎患者的治疗效果有关,为胸腺肽α1临床应用于慢性乙型肝炎患者的治疗提供了一定的理论指导。
【关键词】：胸腺肽α1 T淋巴细胞 细胞因子 慢性乙型肝炎
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-14
• 1 前言14-20
• 1.1 胸腺及胸腺激素14
• 1.2 胸腺肽 α1 的分布及结构14-15
• 1.3 慢性乙型肝炎患者中细胞免疫应答的变化15-16
• 1.4 胸腺肽 α1 的临床应用及研究进展16-20
• 2 不同浓度的胸腺肽α1 对正常小鼠T细胞亚群及细胞因子的影响20-36
• 2.1 实验设计20
• 2.1.1 动物选择20
• 2.1.2 测试指标20
• 2.2 实验材料20-21
• 2.2.1 试剂20-21
• 2.2.2 材料21
• 2.3 仪器设备21-22
• 2.4 溶液配制22-23
• 2.5 实验方法23-26
• 2.5.1 流式细胞术检测不同浓度的胸腺肽α1 对正常小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的影响23-24
• 2.5.2 流式细胞术检测不同浓度的胸腺肽 α1 对正常小鼠脾脏T淋巴细胞活化的影响24
• 2.5.3 RT-PCR检测不同浓度的胸腺肽 α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中细胞因子表达的影响24-26
• 2.6 统计学处理26-27
• 2.7 实验结果27-36
• 2.7.1 不同浓度的胸腺肽α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中CD4~+T淋巴细胞增殖的影响27-28
• 2.7.2 不同浓度的胸腺肽α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中CD8~+T淋巴细胞增殖的影响28-29
• 2.7.3 不同浓度的胸腺肽α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中CD4~+T淋巴细胞活化的影响29-30
• 2.7.4 不同浓度的胸腺肽α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中CD8~+T淋巴细胞活化的影响30-31
• 2.7.5 不同浓度的胸腺肽 α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中IL-2 的影响31-32
• 2.7.6 不同浓度的胸腺肽α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的影响32
• 2.7.7 不同浓度的胸腺肽 α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中IL-4 的影响32-33
• 2.7.8 不同浓度的胸腺肽 α1 对正常小鼠脾淋巴细胞中IL-10 的影响33-36
• 3 胸腺肽α1 对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞T淋巴细胞的影响36-52
• 3.1 实验设计36
• 3.2 研究对象36-37
• 3.2.1 病例选择36-37
• 3.3 主要试剂及仪器37
• 3.4 实验方法37-39
• 3.4.1 慢性乙肝患者外周血淋巴细胞的获取37-38
• 3.4.2 慢性乙肝患者外周血淋巴细胞培养与给药38
• 3.4.3 流式细胞仪术检测胸腺肽α1 对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞活化的影响38-39
• 3.4.4 RT-PCR检测胸腺肽α1 对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞细胞因子表达的影响39
• 3.5 统计学处理39
• 3.6 实验结果39-52
• 3.6.1 胸腺肽 α1 对慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T淋巴细胞的影响39-41
• 3.6.2 胸腺肽 α1 对慢性乙型肝炎患者外周血CD8~+T淋巴细胞的影响41-42
• 3.6.3 胸腺肽 α1 对慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T淋巴细胞中CD45RA~+、CD45RO~+、CD45RA~+CD45RO~+T淋巴细胞的影响42-46
• 3.6.4 胸腺肽 α1 对慢性乙型肝炎患者外周血CD8~+T淋巴细胞中CD45RA~+、CD45RO~+、CD45RA~+CD45RO~+T淋巴细胞的影响46-50
• 3.6.5 胸腺肽 α1 对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞中IFN-γ的影响50
• 3.6.6 胸腺肽 α1 对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞中IL-4 的影响50-52
• 4 讨论52-56
• 5 结论56-58
• 参考文献58-63
• 文献综述 胸腺肽α1在治疗慢性乙型肝炎方面的研究进展63-70
• 参考文献67-70
• 致谢70-71
• 攻读硕士期间发表的论文71-72

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