穿膜肽AR-23增强聚乙烯亚胺介导的基因转染效率及其机制的初步研究

发布时间：2017-09-26 06:16

  本文关键词：穿膜肽AR-23增强聚乙烯亚胺介导的基因转染效率及其机制的初步研究

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【摘要】：目的研究穿膜肽AR-23[蜂毒肽相关肽,来自日本蛙(Rana tagoi)]的极性电荷区对细胞穿膜作用的影响及其在促进聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的基因转染中的作用。方法分别合成了穿膜肽AR-23及由疏水核心区组成的截短肽AR-20;利用圆二色谱(CD)分析二级结构;通过溶血实验比较两者的细胞膜穿透能力;利用去极化实验分析穿膜肽与细胞膜的相互作用方式;将穿膜肽与PEI按一定比例混合,以绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(luciferase)为报告基因检测基因在HeLa和RAW264.7细胞中的转染效率,用MTT法测定基因转染后细胞的毒性。结果在以甲醇模拟的细胞膜环境中,AR-23呈现出典型的α-螺旋结构,α-螺旋率为37.6%,而AR-20未呈现出典型的α-螺旋结构峰;在偏酸性和中性条件下,AR-23均能穿透细胞膜导致红细胞溶血,而AR-20不具备溶血作用;AR-23对细胞膜具有较强的去极化作用,而AR-20去极化能力极弱;AR-23可明显增强PEI介导的基因在HeLa和RAW264.7细胞中的转染效率,并且不引起转染后细胞的S毒性,AR-20则不具备增强基因转染效率的作用。结论 AR-23的极性电荷区对于维持其α-螺旋结构和穿膜能力至关重要。AR-23能够提高PEI介导的基因转染效率而不会导致细胞毒性,是一种理想的基因转染增强剂。
【作者单位】： 中南大学生物科学与技术学院;军事医学科学院野战输血研究所;
【关键词】： 蜂毒肽 穿膜肽 聚乙烯亚胺 膜穿透活性 基因转染
【分类号】：R392
【正文快照】： 基因治疗的关键是如何高效地将目的基因递送到靶细胞并且发挥生物学功能,在此过程中,基因载体发挥着至关重要的作用。基因载体分为病毒载体和非病毒载体,常用的病毒载体如腺病毒和慢病毒等,虽然经过改造去除了病原性而保留了高水平的基因递送效率,但其制备困难,目的基因插入

【共引文献】

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1 王傅U，

本文编号：921911