日本血吸虫虫卵SjE16、SjPPIase和SjRobl基因的真核表达及其在诊断中的应用

发布时间：2017-10-01 17:20

  本文关键词：日本血吸虫虫卵SjE16、SjPPIase和SjRobl基因的真核表达及其在诊断中的应用

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【摘要】：目的真核表达日本血吸虫虫卵蛋白,并评价其在血吸虫病免疫学诊断中的作用。方法提取日本血吸虫虫卵RNA,逆转录后获得cDNA。PCR扩增日本血吸虫虫卵特异性或高表达基因SJCHGC01695(SjE16)、SJCHGC00856(SjIMA8)、SJCHGC06249(SjTOR)、SJCHGC06324(SjP40)、SJEFTD02(SjSLP)、SJCHGC06679(SjP-PIase)和SJCHGC06529(SjRobl),亚克隆至真核表达载体pPIC9K。重组质粒电转至毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导目的蛋白表达。镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化获取重组蛋白后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)对其进行分析鉴定。以血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl单用,3个重组蛋白两两伍用,及全部伍用作为包被抗原,ELISA法检测血吸虫感染小鼠血清、急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清中相应抗体的反应性。结果PCR扩增获得7个日本血吸虫虫卵高表达基因,经酵母重组表达和Ni-NTA亲和层析纯化后成功获得3个重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果显示,所获得的重组蛋白为目的蛋白。ELISA检测结果显示,血吸虫感染小鼠血清和血吸虫病患者血清中均可检测出被SjE16、SjPPIase和SjRobl识别的特异性IgM和IgG抗体。在急性血吸虫病患者中上述3种抗原IgM的检出率分别为80%、60%和80%,IgG检出率分别为40%、80%和70%。伍用组中,SjE16和SjRobl伍用抗原,检测急性血吸虫病患者血清中IgM抗体的敏感性为100%,高于其单独为抗原的敏感性。结论获得的3个日本血吸虫虫卵蛋白(SjE16、SjPPIase和SjRobl)均具有血吸虫病诊断的潜能,其中SjE16和SjRobl伍用抗原可提高急性血吸虫病诊断敏感性。
【作者单位】： 上海交通大学医学院病原生物学教研室;
【关键词】： 日本血吸虫 虫卵高表达基因 真核表达 免疫学诊断
【基金】：国家自然科学基金(No.30600517,81172808) 高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金(No.201179)~~
【分类号】：R383.24
【正文快照】： 血吸虫流行于76个国家,全球约有2.07亿人患血吸虫病,严重危害人类健康[1]。虫卵是血吸虫最主要的致病阶段,沉积于宿主组织内的虫卵可分泌可溶性抗原刺激机体产生强烈的免疫应答反应,形成虫卵肉芽肿,对组织造成免疫损伤[2]。血吸虫虫卵抗原与宿主免疫反应的关系一直为众多研究

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王兆军,胡薇,沈大康,武小文,王聚君,韩泽广,薛纯良;日本血吸虫SjE16基因的原核表达及其免疫诊断应用潜能[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2003年02期

2 卢艳;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陈绅波;冯正;王小宁;胡薇;;日本血吸虫含EF-手型结构域钙结合蛋白的克隆表达与免疫诊断分析[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2012年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑辉;吴峗;沈继龙;;血吸虫病免疫诊断抗原研究进展[J];临床输血与检验;2008年03期

2 潘丽红;沈际佳;;重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断研究进展[J];热带病与寄生虫学;2007年03期

3 胡永轩;肖建华;杨秋林;黄家芳;;Sjcb2基因原核表达载体的构建及表达[J];中国热带医学;2006年08期

4 吴锦雅;周晓红;陈晓光;;重组抗原用于血吸虫病免疫诊断研究进展[J];中国血吸虫病防治杂志;2006年04期

5 吕志跃;杨琳琳;胡旭初;周何军;王丽;张双民;孙希;胡斐;郑焕欣;曹爱莲;余新炳;吴忠道;;日本血吸虫SjCa8基因的原核表达及其免疫学特征分析[J];中国地方病学杂志;2006年05期

6 郑莉;徐兴建;董惠芬;;日本血吸虫特异性抗体与诊断抗原的应用研究进展[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2005年06期

7 卢艳;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陈绅波;冯正;王小宁;胡薇;;日本血吸虫含EF-手型结构域钙结合蛋白的克隆表达与免疫诊断分析[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2012年03期

8 干小仙,王越,曾肖們,丁建祖,沈慧英,沈丽英,Paul Brindley,樊晋江;重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究[J];中国人兽共患病杂志;2004年08期

9 李俊立;王昌富;;日本血吸虫病重组诊断抗原研究进展[J];中国血吸虫病防治杂志;2013年01期

10 魏刚刚;徐斌;鞠川;胡薇;;日本血吸虫核糖体蛋白SjRibosom al_L18a及其B细胞表位的筛选和评价[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2013年04期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 卢艳;日本血吸虫诊断抗原的筛选、鉴定及初步评价[D];华东理工大学;2012年

2 闻礼永;日本血吸虫大陆株硫氧还蛋白在毕氏酵母菌的克隆表达及其免疫反应性研究[D];南京医科大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前9条

1 吴锦雅;重组SjP38抗原诊断日本血吸虫病的研究[D];第一军医大学;2005年

2 郑莉;湖北省血吸虫病病情分析及检测方法的改进[D];武汉大学;2005年

3 李敏;日本血吸虫信号蛋白14-3-3的免疫诊断及虫卵cDNA文库的构建[D];安徽医科大学;2007年

4 潘丽红;重组Sj-Ts4样蛋白在日本血吸虫病免疫诊断中的初步应用[D];安徽医科大学;2007年

5 李友;牛血吸虫病分子ELISA诊断方法的建立和应用[D];华中农业大学;2008年

6 郑辉;日本血吸虫成虫可溶性抗原蛋白质谱鉴定与生物信息学分析[D];安徽医科大学;2009年

7 余路新;日本血吸虫重组蛋白抗原RPS4诊断血吸虫病的研究[D];中南大学;2009年

8 王萍;日本血吸虫重组膜外蛋白rSj29免疫诊断的初步应用及代谢抗原单克隆抗体的制备[D];安徽医科大学;2010年

9 郭艳红;家畜日本血吸虫病诊断试纸条研制及望江县放牧牛蠕虫感染状况调查[D];中国农业科学院;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 于复东;康斌;李园园;李亦学;;预测和分析血吸虫含有EF-hand结构域的表膜蛋白的功能[J];科学通报;2007年13期

2 周帅锋;余路新;汪世平;;血吸虫病的诊断检测技术及研究进展[J];热带医学杂志;2009年03期

3 郝阳;郑浩;朱蓉;郭家钢;王立英;陈朝;周晓农;;2009年全国血吸虫病疫情通报[J];中国血吸虫病防治杂志;2010年06期

4 舒新华,易新元;重组血吸虫诊断抗原研究进展[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2000年04期

5 王兆军,胡薇,沈大康,武小文,王聚君,韩泽广,薛纯良;日本血吸虫SjE16基因的原核表达及其免疫诊断应用潜能[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2003年02期

6 郑莉;徐兴建;董惠芬;;日本血吸虫特异性抗体与诊断抗原的应用研究进展[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2005年06期

7 蔡辉霞;沈玉娟;韩秀敏;袁忠英;王虎;徐馀信;胡媛;卢潍媛;官亚宜;曹建平;;细粒棘球蚴抗原EPC1基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2011年03期

8 卢艳;徐斌;鞠川;莫筱瑾;陈绅波;冯正;王小宁;胡薇;;日本血吸虫虫卵cDNA文库的免疫筛选和阳性克隆的鉴定[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2012年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 彭善友,黎辉,王则胜;日本血吸虫虫卵的图像分析研究[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2000年04期

2 彭善友,黎辉,王则胜;日本血吸虫虫卵的二维数据测量[J];中国寄生虫病防治杂志;2001年01期

3 朱明东,洪玲娣,卓敏敏,林祖昌;日本血吸虫虫卵分离方法的改进[J];中国血吸虫病防治杂志;1998年03期

4 许世锷,陆秀君,谢霖崇,张大鹏,胡隆大;日本血吸虫虫卵、毛蚴及尾蚴的扫描电镜观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1983年04期

5 Cheever AW ,陈名刚;日本血吸虫实验感染的病理学[J];国际医学寄生虫病杂志;1986年01期

6 张国芳,陈孝龄,藤怀妹;日本血吸虫虫卵不同发育期的扫描电镜观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1986年04期

7 陈国瑜;;体外培养日本血吸虫虫卵直至孵出毛蚴以及向胞蚴转变的研究[J];预防医学情报杂志;1986年04期

8 张立煌;抗IL-5和抗IFN-γ抗体对感染日本血吸虫小鼠虫卵肉芽肿形成的作用[J];国际医学寄生虫病杂志;1992年06期

9 黄成玉;卢艳;王玮;鞠川;冯正;杨忠;王升跃;胡薇;;日本血吸虫弹性蛋白酶基因的克隆、表达及虫期特异性转录[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2007年05期

10 温慧初;用放射免疫试验检测人血清中抗日本血吸虫虫卵抗体[J];国际医学寄生虫病杂志;1982年02期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 叶冬青;;血吸虫病防治的出路在何方[A];“安徽公共卫生体系建设”——首届安徽博士科技论坛论文集[C];2003年

，

本文编号：954708