胸腺素β4促进肝前体细胞分化为肝细胞的体外研究

发布时间：2017-10-25 06:33

  本文关键词：胸腺素β4促进肝前体细胞分化为肝细胞的体外研究

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【摘要】：目的 探索胸腺素p4(Tβ4)对肝前体细胞(WB-F344细胞)增殖及分化的影响,研究Tβ4诱导分化细胞的功能,为Tβ4在促进肝前体细胞分化,促进肝再生方面提供理论依据。方法 1.用含不同浓度Tβ4的等量培养液体外培养WB-F344细胞,培养液中Tβ4浓度分别为1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml,相应命名为1ng/ml组、10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组,以无Tβ4培养液培养的细胞为空白对照组。在加入处理因素培养细胞1天、2天及3天后,采用CCK-8方法检测各组Tβ4对F344细胞增殖的影响,同时观察Tβ4对WB-F344细胞形态的影响。 2.选择对WB-F344细胞增殖影响有统计学意义的组(10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组),同时设立空白对照组,采用qRT-PCR方法检测肝细胞标志物(白蛋白)、肝干细胞标志物(甲胎蛋白)及胆管细胞标志物(细胞角蛋白-19)基因的表达,采用Western blot方法检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)及细胞角蛋白-19(CK-19)蛋白的表达,确定Tβ4可诱导WB-F344细胞分化为何种细胞。在加入处理因素5天后,观察Tβ4诱导细胞的糖原合成功能,吲哚靛青绿摄取情况,研究Tβ4诱导细胞可发挥的功能。 结果 1.细胞增殖实验发现：加入处理因素1天及2天后,实验组细胞增殖与对照组相比无明显差异,而在加入处理因素3天后,10ng/ml组.、100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比,细胞增殖速度减缓(P0.05)。同时,Tβ4诱导培养细胞的细胞核由肝前体细胞的单核细胞向肝细胞样细胞的双核或多核细胞转变。 2.在加入处理因素后3天后,qRT-PCR结果显示：100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比,ALB基因表达量明显增加,差异具有统计学意义(P均0.05),Western blot结果显示：10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比,CK-19蛋白表达量下降,差异有统计学意义(P均0.05)。在加入处理因素5天后,Western blot结果显示：10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比,AFP蛋白表达量下降(P均0.05),在100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比,ALB蛋白表达量增加(P均0.05),呈现一定的剂量依赖性。 3.在细胞功能方面：在加入处理因素后5天后,糖原染色结果及ICG摄取实验结果显示Tβ4诱导细胞较对照组相比,糖原合成及ICG摄取增多,且在1μg/ml组最明显。 结论 Tβ4可诱导WB-F344细胞向成熟肝细胞方向分化,且诱导分化的细胞具备一定的成熟肝细胞的功能,为Tβ4应用于肝再生提供一定的理论依据。
【关键词】：胸腺素β4 肝脏前体细胞 分化 肝细胞 肝再生
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略语/符号说明10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 1.1 对象与方法16-34
• 1.1.1 研究对象16
• 1.1.2 主要试剂16-18
• 1.1.3 主要仪器设备18-19
• 1.1.4 主要溶液及其配制19-23
• 1.1.5 WB-F344细胞培养方法23-26
• 1.1.6 应用CCK-8方法测定Tβ4对细胞增殖的影响26-27
• 1.1.7 Tβ4诱导WB-F344细胞的处理27
• 1.1.8 qRT-PCR方法检测AFP、ALB、CK-19的mRNA表达27-30
• 1.1.9 Western Blot方法检测AFP、ALB、CK-19的蛋白表达30-33
• 1.1.10 细胞的过碘酸雪夫染色33
• 1.1.11 细胞的吲哚靛青绿摄取实验33-34
• 1.1.12 统计学处理34
• 1.2 结果34-42
• 1.2.1 不同浓度Tβ4对WB-F344细胞增殖的影响34-35
• 1.2.2 不同浓度Tβ4对WB-F344细胞形态的影响35-36
• 1.2.3 Tβ4对WB-F344细胞AFP、ALB、CK-19基因表达的影响36-37
• 1.2.4 Tβ4对WB-F344细胞AFP、ALB、CK-19蛋白表达的影响37-39
• 1.2.5 Tβ4对WB-F344细胞糖原合成功能的影响39-40
• 1.2.6 Tβ4对WB-F344细胞ICG摄取能力的影响40-42
• 1.3 讨论42-48
• 1.3.1 Tβ4结构及生物学特点42-43
• 1.3.2 Tβ4与细胞再生43-44
• 1.3.3 肝细胞再生方式44-45
• 1.3.4 WB-F344细胞是一种双向分化潜能的肝前体细胞45-46
• 1.3.5 肝前体细胞分化过程中细胞标志物的变化46
• 1.3.6 Tβ4在肝衰竭中的应用前景46-48
• 结论48-49
• 参考文献49-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 综述57-66
• 综述参考文献62-66
• 致谢66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 李轩;姜志昕;郝朋;汤欣;;胸腺素β4对体外培养的兔角膜上皮细胞氧化损伤的保护作用[J];中华眼科杂志;2013年08期

2 中华医学会感染病学分会肝衰竭与人工肝学组;中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组;;肝衰竭诊治指南(2012年版)[J];实用肝脏病杂志;2013年03期

3 董娟娟;曾珊;欧阳淼;黄增辉;申z，

本文编号：1092506