休克肠淋巴液对脾树突状细胞免疫功能的影响

发布时间：2017-11-22 17:08

  本文关键词：休克肠淋巴液对脾树突状细胞免疫功能的影响

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【摘要】：背景:免疫功能紊乱是重症失血性休克患者出现全身炎症反应综合征(SIRS)、以及随之而来的多器官功能障碍综合征(MODS)、甚至引起死亡的重要原因。机体中一系列的免疫细胞,通过产生大量细胞因子以非特异性方式对抗外来抗原的入侵。其中,树突状细胞(DCs)等抗原递呈细胞可将入侵信息递呈给T淋巴细胞,启动长期特异性免疫机制,从而发挥抗感染的作用。研究表明,失血性休克发展过程中,先天免疫最先受累,并进一步导致免疫功能抑制、促进炎症全身扩散,是发生SIRS、MODS与脓毒症的重要免疫学基础。休克肠淋巴液回流是失血性休克后组织损伤、器官功能障碍的重要发病学基础;已有的研究也发现,阻断休克肠淋巴液回流可降低脾脏、胸腺等免疫器官的结构损伤,改善细胞免疫功能。但休克肠淋巴液回流与DCs这一启动细胞免疫功能的抗原递呈细胞之间的关系,还不清楚。目的:本研究在建立失血性休克小鼠模型的基础上,应用脾DCs免疫磁珠分离技术,观察肠淋巴液引流、肠淋巴液孵育对DCs在脂多糖(LPS)处理前后产生细胞因子能力的影响,初步揭示肠淋巴液对DCs免疫功能的调节作用。方法:健康雄性BALB/C小鼠,分为假手术组、休克组、休克+引流组。休克组与休克+引流组动物复制失血性休克模型(40±2 mm Hg维持60 min后行液体复苏),休克+引流组动物于液体复苏结束即刻行肠淋巴液引流,3 h后或假手术组于相应时间点,取脾,应用免疫磁珠法(抗CD11c)分选获取脾脏DCs;离体培养环境状态下,观察三组小鼠脾DCs以及在LPS孵育后产生TNF-α、IL-10、IL-12的能力。取健康雄性BALB/C小鼠,复制失血性休克模型,部分引流低血压60 min期间的休克期肠淋巴液(post-hemorrhagic shock mesenteric lymph during hypotenstion,PHSML-H),部分引流液体复苏后肠淋巴液(post-hemorrhagic shcok and mesenteric lymph after resuscitation,PHSML-R),取正常小鼠引流正常肠淋巴液(normal mesenteric lymph,NML);然后取正常小鼠脾脏,应用免疫磁珠法分选获取脾脏DCs;将NML、PHSML-H、PHSML-R分别与正常DCs培养,并以LPS做为阳性对照,同时设空白对照,观察各组DCs在3、6、12、24 h以及再次分别与LPS处理后24 h产生TNF-α、IL-10、IL-12的能力。结果:急性分离的脾DCs,经免疫磁珠分选、流式细胞术检测,获得的CD11c+细胞纯度均在90%以上。假手术组、休克组和休克+引流组小鼠急性分离的脾DCs,在体外培养24 h后,各组间培养上清液中TNFα、IL-10和IL-12含量未见统计学差异(P0.05);各组脾DCs与LPS共孵育24 h后,假手术组与休克+引流组培养上清液中的TNF-α、IL-10和IL-12含量、以及休克组培养上清液中的TNF-α、IL-10的含量均显著高于组内未经LPS处理组(P0.05);更重要的是,结果发现休克组TNFα、IL-12以及休克+引流组IL-12的含量均显著低于假手术组(P0.05);休克+引流组TNFα的含量显著高于休克组(P0.05)。急性分离的小鼠脾DCs经肠淋巴液处理后的结果显示,PHSML-H、PHSML-R在多个时间点引起了DCs培养上清液中TNF-α、IL-10的增加,但并未引起IL-12水平的变化,且TNF-α、IL-10均显著低于LPS阳性对照同一时间点的浓度;已经与各种因素孵育后的DCs再次接受LPS刺激,与PHSML-H、PHSML-R孵育后的DCs产生TNF-α、IL-10、IL-12的能力有一定的增强,但仍有多个时间点低于LPS阳性对照组,尤其是PHSML-R孵育组更是远远低于LPS阳性对照组。结论:失血性休克引起了脾DCs分泌细胞因子的功能障碍,这是失血性休克后免疫功能抑制的原因之一;以肠淋巴液引流的方式减少休克肠淋巴液回流,对恢复脾DCs功能具有一定的有利的作用,这是阻断休克肠淋巴液回流改善机制免疫功能的机制之一。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R459.7

【参考文献】

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1 刘华;邢立强;赵自刚;牛春雨;;肠淋巴液引流减轻失血性休克大鼠脾组织损伤的作用与机制[J];中国病理生理杂志;2013年08期

2 刘星;梁平;周波;张克勤;靳风烁;李彦锋;;膀胱肿瘤患者外周血源性树突状细胞表型及免疫功能变化[J];第三军医大学学报;2013年09期

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本文编号：1215412