骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性肝衰竭保护作用的实验研究

发布时间：2017-11-30 11:28

  本文关键词：骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性肝衰竭保护作用的实验研究

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【摘要】：研究目的：分离纯化大鼠骨髓间充质细胞(BMSCs),探讨BMSCs移植对硫代乙酰胺(TAA)诱导的急性肝衰竭大鼠生存率、肝功能、肝脏病理及细胞因子的影响。 研究方法： 1.采用不同浓度TAA两次灌胃造模,通过观察大鼠死亡率及肝脏病检,从而确定TAA建立大鼠急性肝衰竭模型的最适剂量。 2.采用全骨髓贴壁培养法分离并纯化大鼠BMSCs,经流式细胞仪检测其表面抗原分子、细胞周期,经成脂诱导培养基体外诱导分化,从而鉴定其是否为BMSCs。 3.将170只大鼠随机分为空白对照组(20只)、BMSCs移植组(75只)、模型组(75只)。BMSCs移植组及模型组中各随机抽取25只用以观察并记录大鼠两次灌胃后96h内的存活情况。制备大鼠ALF模型,BMSCs移植组经尾静脉注射BrdU标记的BMSCs,模型组则注射PBS,空白对照组予以生理盐水两次灌胃,尾静脉注射PBS。于两次灌胃后24h、48h、72h及96h分别随机在各组抽取5只大鼠腹腔麻醉,腹主动脉取血以检测ALT、AST、TBil、AFP、TNF-a及IL-6水平,同时每只大鼠分别取相同部位肝组织,制作肝组织HE染色病理切片、冰冻切片以及行Western blot检测肝组织中TNF-α和IL-6的表达水平。 结果： 1.两次灌胃后96h400mg组大鼠死亡率明显高于300mg组,300mg组死亡率明显高于200mg组(P0.0083),200mg组与对照组死亡率无差异。肝脏炎症程度随着TAA剂量的加大,逐渐加重,300mg组即出现肝细胞大片状坏死。 2.所培养的细胞呈均一梭型,漩涡状排列,流式细胞仪检测显示P3代大鼠BMSCs强表达CD29,基本不表达造血细胞表面标志CD34,体外诱导可分化为脂肪细胞。 3.两次灌胃后48h及其以后在移植组大鼠肝脏内发现大量定植的BMSCs。 4.两次灌胃后96h模型组大鼠死亡率明显高于移植组(P0.05)。 5.模型组和BMSCs移植组的肝功能指标ALT、AST和TBil水平在各个时间点均明显高于空白对照组(P0.001),同时在72h和96h时,模型组ALT、AST和TBil水平均明显高于BMSCs移植组(P0.001)。 6.两次灌胃后空白对照组和模型组的AFP水平在各个时间点没有差异(P0.05)；而在96h时BMSCs移植组AFP水平明显高于空白对照组和模型组(P0.001)。 7.两次灌胃24h及其以后,BMSCs移植组和模型组的肝脏炎症活动评分均较空白对照组高(P0.001)；同时在48h及其以后BMSCs移植组肝脏炎症活动评分均明显低于模型组(P0.05)。 8.两次灌胃24h及其以后BMSCs移植组和模型组的血浆TNF-α及IL-6水平较空白对照组均明显升高(P0.001)；同时BMSCs移植组的TNF-α及IL-6水平明显低于模型组(P0.001)。肝组织中TNF-a及IL-6的表达水平在48h及96h移植组均低于模型组(P0.05)。 结论： 1.300mg/kg TAA两次灌胃是造成大鼠ALF动物模型的最适剂量,可建立稳定的大鼠ALF模型。 2.通过贴壁筛选培养法可分离获得纯度较高的大鼠BMSCs。 3.大鼠P3代BMSCs纯度比较高,形态稳定,活率高,具有强大的增殖能力,具有干细胞的一般生物学特性,故选取此代细胞用于后续实验。 4. BMSCs通过尾静脉移植可归巢到大鼠受损的肝脏。 5.BMSCs早期移植可能通过分化为肝样细胞和降低炎症因子TNF-α、IL-6来显著降低大鼠死亡率、改善大鼠肝功能、减轻肝脏炎症程度,从而延缓大鼠ALF的进程,对ALF具有一定的保护作用。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.3

【参考文献】

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本文编号：1239161