胍丁胺对脓毒症小鼠的保护作用及分子机制研究

发布时间：2017-11-30 14:13

  本文关键词：胍丁胺对脓毒症小鼠的保护作用及分子机制研究

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【摘要】：目的： 探讨胍丁胺对脂多糖诱导的小鼠脓毒症的保护作用及相关分子机制。 方法： 1、将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组（20只，腹腔注射磷酸盐缓冲液）、LPS模型组（20只，腹腔注射LPS10mg/kg）和AGM治疗组（20只，腹腔注射LPS10mg/kg和AGM200mg/kg），各组于制模后6h和24h分别处死10只小鼠，采集血和肝、肺、肠脏器组织标本。处死小鼠前，持续观察小鼠生命状态。 2、ELISA检测血清及脏器组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）的含量，全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBil）水平，苏木精-伊红染色观察各脏器组织病理学改变，TUNEL凋亡试剂盒检测肺和小肠组织凋亡情况。 3、体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，使用胍丁胺治疗经LPS刺激的RAW264.7细胞，在不同时间点收集细胞蛋白和细胞培养上清。ELISA检测细胞上清TNF-α、IL-1β、IL-6含量，Western Blot检测胞浆p-IκB、IκB、p-p65、p65，ELISA检测胞核NF-κB p65的DNA结合活力。 结果： 1、LPS注射6h各组小鼠均表现为精神萎靡、蜷缩少动、禁饮食水，但其中AGM治疗组小鼠精神和活动明显好于LPS模型组。AGM治疗后能有效降低LPS所致小鼠外周血中炎症因子TNF-α（ng/ml:296.3±42.5比627.2±81.3，P0.05）、IL-1β（ng/ml:109±12.3比264±18.8，P0.05）、IL-6（μg/ml:11.4±1.9比23.6±2.5，P0.05）和ALT（U/L:107.9±8.5比189.9±13.6，P0.05）、AST（U/L:347.4±24.9比716.8±60.4，，P0.05）、TBIL（μmol/L:8.3±1.9比10.6±2.5，P0.05）的含量，减少肝脏组织匀浆中TNF-α（ng/g:287.4±32.5比461±31.4，P0.05）、IL-1β（pg/g:146±13.5比351±28.7，P0.05）和NF-κB p65入核蛋白水平（NF-κB/核内参灰度值比值：0.54比0.85，P0.05）。 2、LPS注射后24h肝、肺、小肠出现明显病理改变，组织细胞肿胀、坏死、充血和炎性细胞浸润，但AGM治疗后各脏器组织损伤明显缓解。激光共聚焦显微镜观察显示LPS炎症组小鼠肺和小肠组织发生明显的凋亡，核固缩、核碎裂、核溶解，并且出现大量的DNA断裂片段，AGM治疗组脏器组织凋亡明显减少。 3、体外实验中，炎性巨噬细胞在接受胍丁胺处理后，表达TNF-α、IL-1β和IL-6明显减少，IκB磷酸化受到抑制，p-p65磷酸化和入核也明显受抑，NF-κB p65的DNA结合活力明显减弱。 结论： 1、AGM能够抑制LPS诱导的脓毒症小鼠血清和脏器炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的产生，表明AGM具有全身抗炎作用。 2、AGM能够减少LPS诱导的脓毒症时ALT、AST和TBil的产生，减轻肝、肺和小肠组织炎症损伤，抑制脏器组织细胞凋亡，表明AGM对脓毒症小鼠脏器有明显保护作用。 3、胍丁胺能减少炎性巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达，抑制IκB的磷酸化，阻止p-p65的磷酸化和入核，并减弱NF-κB p65的DNA结合活力，表明胍丁胺能抑制炎性巨噬细胞NF-κB信号通路的活化。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R459.7

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本文编号：1239582