硫化氢对蛛网膜下腔出血早期脑损伤的保护作用

发布时间：2017-12-11 04:35

  本文关键词：硫化氢对蛛网膜下腔出血早期脑损伤的保护作用

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【摘要】：研究目的： 建立大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）模型，通过检测脑组织中的GFAP、MMP-9、c-fos、caspase-3及Bcl-2的表达变化，探讨外源性硫化氢供体硫氢化钠(sodium hydrosulfide, NaHS)对SAH早期脑损伤的保护作用及可能机制。 方法： 1.大鼠SAH模型的建立，参照Ayer RE等的方法进行并加以改良。 2.实验分组： 假手术组：大鼠10只，线栓进入颈内动脉后不刺破分叉处，腹腔注射0.5mL生理盐水，24h神经学评分观察。 SAH组：大鼠10只，如模型建立方法，腹腔注射0.5mL生理盐水，24h神经学评分观察。 H2S组：大鼠48只，建立SAH后，腹腔注入NaHS，浓度分别为0μmol/kg、6.25μmol/kg、12.5μmol/kg、25μmol/kg、50μmol/kg，根据浓度和大鼠重量计算NaHS的量，，溶于0.5mL生理盐水中。其中NaHS50μmol/kg组大鼠按12h、24h、48h各6只大鼠，多聚甲醛灌注、取脑、冰冻切片，备用；NaHS各浓度组6只大鼠用于Western-blot检测。 3.用免疫荧光和Western-blot检测海马皮质和额顶叶皮质GFAP、MMP-9、c-fos、Bcl-2和caspase-3表达的影响。 4．统计学分析：各组数据采用SPSS13.0软件包进行统计分析，各组之间的比较采用单因素方差分析，0.05为差异有统计学意义。Western blot结果应用Imagej和GraphPad Prism5软件进行分析，其值用灰度比值表示。 结果： 1．硫化氢对SAH早期脑损伤的保护作用：模型建立后，用神经评分法进行评分，结果表明，H2S有明显改善脑功能的作用，死亡率从50%降到10%。 2.硫化氢对GFAP表达的影响：我们用免疫荧光和Western-blot检测了海马和额顶叶皮质GFAP的表达，结果表明，假手术组星形胶质细胞的GFAP呈低表达，SAH模型组表达明显增多（P＜0.05），相较于模型组，硫化氢组则表达明显减少（P＜0.01）。 3.硫化氢对脑损伤因子MMP-9和c-fos表达的影响：Western-blot检测分析结果显示， SAH模型组与假手术组相比MMP-9和c-fos蛋白表达明显增加（P＜0.01），而硫化氢组表达明显减少（P＜0.05）。 4.硫化氢对凋亡因子Bcl-2和caspase-3表达的影响：免疫荧光和Western-blot检测结果显示，海马皮质Bcl-2的阳性细胞主要分布在C2和C3区，假手术组和SAH组都呈阳性表达，但硫化氢组Bcl-2阳性细胞明显增加（P＜0.05）；caspase-3免疫荧光和Western-blot检测结果显示， SAH模型组与假手术组相比表达增强，阳性细胞明显增多，而硫化氢组阳性细胞明显减少（P＜0.001）。 结论： 1、SAH后可诱发大脑海马皮质和额顶叶皮质GFAP表达增多。H2S干预SAH后，GFAP表达有明显下调，H2S对脑损伤的保护作用可能与改善胶质细胞功能有关。 2、SAH后海马皮质和额顶叶皮质的MMP-9、c-fos因子表达增多。H2S处理后明显降低两个因子的表达，这表明H2S对神经元的损伤有保护作用。 3、SAH后H2S有明显改善凋亡因子caspase-3、Bcl-2的表达，表明H2S对脑损伤的保护作用可能与凋亡机制有关。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R651.15

【参考文献】

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本文编号：1277218