脓毒症大鼠血清Ang-2的动态变化及其与脓毒症肺损伤的关系

发布时间：2017-12-15 22:34

  本文关键词：脓毒症大鼠血清Ang-2的动态变化及其与脓毒症肺损伤的关系

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【摘要】：目的： 血管生成素-2(Angiopoietin-2, Ang-2)是由血管内皮细胞合成并储存于内皮细胞特有的怀布尔一帕拉德小体(Weibel-Palade小体),它可以造成血管内皮细胞损伤,内皮屏障破坏,微血管渗漏,组织水肿,组织损伤。对严重脓毒症肺毛细血管高通透性具有重要病理作用,可以作为反映肺血管通透性的生物标志物,目前临床尚未监测其动态变化。本研究建立两组脓毒症大鼠模型,使其24小时死亡率明显不同,检测两组大鼠发病过程中不同时间点血清血管生成素-2水平,绘制Ang-2动态变化曲线；比较不同组间大鼠血清Ang-2水平差异；初步探讨脓毒症大鼠血清Ang-2水平与脓毒症介导急性肺损伤(acute lung injury induced by sepsis, sepsis-ALI)的关系,为进一步临床研究提供依据。方法： 雄性SD大鼠62只,体重180-220g,分2部分,第1部分用于绘制脓毒症大鼠Ang-2动态变化曲线,共32只,随机分为对照组(C组)6只,给予麻醉后不做任何处理；假手术组(O组)6只,开腹翻动盲肠后直接关腹；脓毒症1组(S1组)10只,行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP),距盲肠远端1cm处结扎,16G针头贯通穿刺1次；脓毒症2组(S2组)10只,行CLP术,距盲肠远端2cm处结扎,16G针头贯通穿刺2次。分别于造模成功后Oh、3h、6h、12h、18h、24h、36h、48h、72h毛细管内眦取血0.3mL/次,离心取血清采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清Ang-2水平,从而观察各模型组Ang-2动态变化规律。第2部分用于研究Ang-2水平与脓毒症肺损伤的关系,共30只,随机分5组,每组6只(n=6),造脓毒症肺损伤模型,造模方法与S2组相同,分组为L0、L3、L6、L12、L18组,相应于造模后0h、3h、6h、12h、18h分别腹主动脉取血,ELISA法检测血清Ang-2水平,行动脉血气分析,取肺组织计算肺系数,病理切片HE染色观察肺组织损伤程度。统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行数据处理和统计学分析,定性资料采用x2检验,定量资料采用t或F检验,不同组间相应时间点血清Ang-2水平比较采用重复测量资料方差分析,P0.05为差异具有统计学意义。 结果： 1.C组及O组72小时内均无大鼠死亡,72h死亡率为0；S1组16h内无死亡,24h内死亡2只,死亡率20%,72小时内死亡3只,死亡率30%；S2组16小时内无死亡,18小时后开始大量死亡,24小时内死亡9只,死亡率90%,72小时内全部死亡,死亡率100%。S2组24h及72h大鼠死亡率显著高于S1组,差异有统计学意义(P0.01)。第二部分,L12、L18组出现呼吸困难,腹泻,耳部皮肤苍白,尾巴冰凉,肢端青紫,腹腔出现臭味,有脓性液体,结扎盲肠变黑,与周围组织及肠管不同程度粘连,肺组织充血水肿,包膜紧张,氧合指数小于300,肺组织病理显示肺泡间隔有所增厚,间质明显充血水肿,一定量中性粒细胞浸润,少量肺泡萎缩塌陷,气道内含有少量分泌物证实脓毒症肺损伤模型造模成功。 2.各模型组Ang-2的动态变化：C组0h Ang-2水平为(1.57±0.09)ng/mL,随着时间进展,不同时间点Ang-2水平无显著性差异(P0.05)。O组0h Ang-2水平为(1.55±0.32)ng/mL,6h开始明显升高为(2.09±0.20)ng/mL,与0h值相比差异有统计学意义(P0.01),12h达到最高值(2.65±0.23)ng/mL,此后Ang-2水平开始下降,至48h恢复到0h水平并持续至72小时后,与0h值相比差异无统计学意义(P0.05)。S1组0h Ang-2水平为(1.67±0.18)ng/mL,3h开始明显升高为(2.31±0.22)ng/mL,与0h值比较差异有统计学意义(JP0.01),随病程进展逐渐升高至12h达到最高值为(3.57±0.39)ng/mL,并开始下降,48h下降至到最低,但仍高于0h值,方差分析差异有统计学意义(P0.01)。S2组大鼠18小时后开始大量死亡,所以曲线绘至18小时,0h值为(1.56±0.16)ng/mL,3h开始明显升高为(2.27±0.32)ng/mL,与0h值比较差异有统计学意义(P0.01),12h达最高值(3.44±0.42)ng/mL后开始下降,至18h仍高于Oh值,方差分析差异有统计学意义(P0.01)。O组、S1组、S2组血清Ang-2水平均在12h达到最高值,方差分析显示此时间点S1组与S2组Ang-2水平无显著性差异(P0.05),S1组及S2组均显著高于O组(P0.01),O组显著高于C组(P0.01)。 3.脓毒症肺损伤模型组大鼠L0、L3、L6组氧合指数,肺系数各组两两比较差异无显著性(P0.05),肺组织病理示：结构清楚,肺间质仅有少许炎性细胞,肺泡壁结构完整,肺泡内未见水肿液及肺泡萎陷；L12组氧合指数300,肺系数较L0组增加,差异有统计学意义(P0.01),肺组织病理示：肺泡间隔有所增厚,间质明显充血水肿,一定量中性粒细胞浸润,少量肺泡萎缩塌陷,气道内含有少量分泌物。L18组氧合指数200,肺系数较L12组增加,差异有统计学意义(P0.01),肺组织病理示：肺泡间隔明显增厚,结构紊乱,间质充血水肿,大量中性粒细胞浸润,大量肺泡萎缩塌陷,气道内充满红色分泌物。血清Ang-2水平在L0组为(1.49±0.21)ng/mL,L3组为(2.34±0.25)ng/mL,较L0组升高,差异有统计学意义(P0.05),L6组较L3组显著升高,L12组达最高值为(3.47±0.41)ng/mL,L18组较L12组下降,差异有统计学意义(P0.01),但L18组仍显著高于L0组。 结论： 在脓毒症大鼠模型发病过程中血清Ang-2的水平具有一定的规律性,从3小时开始升高,在12h达到高峰,之后有所下降但仍高于正常值。血清Ang-2水平在肺损伤出现之前明显升高,参与肺损伤病变过程,可以作为研究脓毒症及脓毒症肺损伤的一个早期指标。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R459.7

【参考文献】

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1 于亮;段绍斌;居来提;杨东鹰;邓明飞;樊晓静;吾买尔江;史志涛;刘郁;张增峰;;黄芪注射液对两次打击大鼠致多器官功能障碍综合征中心肌和血管内皮细胞损伤的影响[J];中国全科医学;2010年09期

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本文编号：1293703