血管紧张素Ⅱ和5-氮胞苷共诱导后的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的实验研究

发布时间：2018-03-07 03:15

  本文选题：骨髓间充质干细胞　切入点：血管紧张素Ⅱ　出处：《安徽医科大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 研究证实：在体外经5-氮胞苷（5-Aza）诱导后，骨髓间充质干细胞（BMMSCs）可分化成心肌细胞或类心肌细胞（CMCs or CLCs），但分化率很很低。我们的研究旨在寻求一种诱导方式能提高BMMSCs分化成心肌细胞的分化率，并观察诱导后的心肌样细胞能否定植在缺血心肌组织中，并有效的改善心功能。 方法 从SD大鼠中提取BMMSCs，培养至第4代用于实验研究。体外实验分3组：对照组：不添加诱导剂；5-Aza组：向培养液内加入5-Aza诱导剂，使终浓度在10μmol/L；共培养组：向培养液内加入AngⅡ和5-Aza诱导剂，使前者终浓度在0.1μmol/L，后者终浓度在10μmol/L，观察细胞形态学的改变，采用免疫荧光细胞学染色鉴定心肌细胞相关蛋白β-MHC和CTn T的表达，采用PCR鉴定GATA4基因和NKx2.5基因的表达。体内试验：首先通过结扎大鼠的冠状动脉前降支来建立AMI的动物模型，其次将被移植的细胞用4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）标记，并将大鼠分为4组：A组大鼠被移植无血清的DMEM液；B组大鼠被移植没有被诱导的BMMSCs；C组大鼠被移植只被5-Aza诱导的BMMSCs；D组大鼠被移植被AngⅡ和5-Aza共同诱导的BMMSCs。对比组织切片中移植细胞的存活率及大鼠心功能的变化。 结果 1）比较5-Aza和共培养组，可见BMMSCs分化成心肌样细胞的分化率在两组间有明显的统计学差异（p0.05），，共诱导培养后的细胞强阳性表达心肌特异性蛋白。 2）移植后3w，观察到D组CLCs的存活率明显高于B组（p0.05），说明共诱导培养的CLCs更能适应缺血缺氧的环境。 3）比较各组间血流动力学指标，+dp/dtmax及-dp/dtmax均明显升高(p 0.05);LVSP均明显增加(p 0.05)；LVEDP均明显减小(p 0.05)。 4）细胞移植4w后，细胞移植组（B组、C组、D组）残存心肌细胞分布面积明显大于心梗对照组（A组），在移植细胞区域内可见血管再生现象，且胶原纤维沉积明显减少，与此伴随血清VEGF水平表达增高。 结论 AngⅡ联合5-Aza可促进BMMSCs向CLCs分化，这些细胞被移植后在缺血心肌组织中的存活率明显提高，同时能改善急性心肌梗死大鼠的心功能。
[Abstract]:Purpose. The results showed that: after induction with 5-azacytidine (5-Aza) in vitro, Bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) can differentiate into cardiomyocytes or cardiomyocytes, but the differentiation rate is very low. We also observed whether the induced cardiomyoid cells could be implanted in ischemic myocardium and improve cardiac function effectively. Method. BMMSCs were isolated from SD rats and cultured to the 4th generation for experimental study. In vitro, the rats were divided into three groups: control group: control group: adding 5-Aza inducer into the culture medium. In co-culture group, the final concentration of Ang 鈪

本文编号：1577695