放创复合伤大鼠免疫调节变化及pHGF促愈机理的初步研究

发布时间：2018-04-01 09:05

本文选题：放创复合伤　切入点：伤口愈合　出处：《中南大学》2013年硕士论文

【摘要】：目的：已知辐射可导致免疫功能受损,免疫平衡失调。然而,目前对放创复合伤难愈机制的研究仅限于创伤愈合过程的研究,而辐射所致机体免疫调节功能损伤对创伤愈合的影响尚不明确。本部分拟研究放创复合伤免疫调节功能的变化及其对创伤愈合的影响,期望能为放创复合伤难愈机制及促愈治疗的研究提供参考和借鉴。方法：清洁级Wistar雌性大鼠66只,体重200±20g,将实验动物分为正常对照组(正常组,Normal)、单纯创伤组(单伤组,SW)、创伤+5Gy全身照射组(全身照射组,WTR)和创伤+25Gy局部照射组(局部照射组,WLR)共4组。采用5Gy全身照射及25Gy局部照射合并创伤的两种大鼠放创复合伤动物模型。于伤照后3d、7d、14d和28d检测外周血WBC和LYM数量；采用流式细胞术检测外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞及脾脏Treg和Th17细胞比例；并用ELISA法检测血清IFN-γ和IL-4含量。结果：(1)全身照射组和局部照射组伤口愈合均显著延迟,伤口胶原含量均显著降低。(2)全身照射组和局部照射组胸腺和脾脏指数均显著低于单伤组。(3)伤照后3d和7d单伤组外周血WBC和LYM数均低于正常组；伤照后3d至14d全身照射组和局部照射组外周血WBC和LYM数均显著低于正常组和单伤组。(4)伤照后7d至28d,全身照射组和局部照射组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞比例均明显低于正常组；伤照后3d,全身照射组和局部照射组CD4+/CD8+比值均显著高于正常组和单伤组,但局部照射组低于全身照射组。(5)伤照后,单伤组脾脏Treg、Th17细胞比例及其比值均未见明显变化。伤照后3d和7d,全身照射组脾脏Treg细胞比例均显著高于正常组和单伤组,而局部照射组仅在伤照后3d出现显著增加。伤照后3d至7d,全身照射组和局部照射组脾脏Th17细胞比例均较正常组和单伤组显著增加；导致全身照射组和局部照射组Treg/Th17比值均出现明显降低。(6)伤照后3d和7d,全身照射组和局部照射组血清IFN-γ含量均显著低于单伤组和正常组。伤照后不同时间各处理组血清IL-4含量均无显著变化。伤照后3d和7d,全身照射组和局部照射组血清IFN-γ/IL-4比值均明显低于正常组和单伤组,即Th1/Th2平衡向Th2型免疫反应偏移。结论：(1)放创复合伤大鼠伤口愈合显著延迟。(2)单纯皮肤创伤对机体免疫调节功能的影响不明显。(3)合并辐射损伤后,CD4+、 CD8+T淋巴细胞比例均显著降低,而CD4+/CD8+比值显著升高；Treg、Th17细胞比例显著增加,Treg/Th17平衡向Th17偏移；IFN-γ含量明显降低,Thl/Th2平衡模式失调,且合并全身照射时这些变化更为明显,致使机体免疫调节功能紊乱和内稳态失衡,这是导致放创复合伤愈合延迟的重要免疫学机制。目的：本实验室前期研究表明,携带人肝细胞生长因子的重组质粒(pHGF)对放创复合伤具有很好的促愈作用,但其促愈机理尚未完全阐明。本部分拟从免疫学角度探讨pHGF促进放创复合伤愈合的机制,期望能为pHGF的临床实验研究提供进一步的实验依据。方法：清洁级Wistar雌性大鼠66只,体重200±20g,将实验动物分为正常对照组(正常组,Normal),创伤+25Gy局部照射+PBS组(PBS组,PBS),创伤+25Gy局部照射+金因肽组(金因肽组,JYT)和创伤+25Gy局部照射+pHGF组(pHGF组,pHGF),共4组。采用25Gy局部照射合并创伤的大鼠放创复合伤动物模型。于伤照后3d、7d、14d和28d检测外周血WBC和LYM数量；并检测外周血CD4+和CD8+T细胞亚群及脾脏Treg和Th17细胞比例。结果：(1)伤照后28d,pHGF组伤口已经愈合,而PBS组和JYT组尚未完全愈合。(2)与PBS组和JYT组相比,pHGF组创面具有炎性细胞渗出多、肉芽组织丰富、血管生成及表皮细胞增生明显及胶原纤维含量高等特点。(3)伤照后7d和14d,pHGF组外周血WBC和LYM数均显著高于PBS组。(4)伤照后3d,与PBS组比较,pHGF组外周血CD8+T淋巴细胞比例出现明显增加,导致CD4+/CD8+比值出现显著降低。(5)伤照后3d和7d,pHGF组脾脏Treg、Th17细胞比例较PBS组出现显著降低,且于伤照后7d脾脏Treg/Th17比值出现显著增加。结论：(1) pHGF能明显促进放射复合创伤伤口的愈合,表现在促进伤口区肉芽组织的生长、肉芽组织内成纤维细胞增生和毛细血管的生成及促进表皮角质层的形成和重上皮化过程。(2) pHGF能提高外周血CD8+T淋巴细胞比例,改善Treg/Th17失衡状态,从而使机体免疫功能得到改善,内环境稳态得以逐渐恢复,这可能是其促进放创复合伤创而愈合的重要免疫学机制之一。图35幅,表2个,参考文献51篇。
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【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R641

【参考文献】