放创复合伤肉芽组织来源细胞生物学特性的实验研究

发布时间：2019-07-16 07:53

【摘要】：放创复合伤是指合并有放射损伤的复合性创伤,其通常发生于核爆炸、核事故、放射性恐怖袭击以及与临床手术放疗病人当中。放射复合伤的突出特点是多种致伤因素联合作用,显著加重伤情,通常具有很高的致死率。相较于单纯创伤,放创复合损伤伤情更加复杂并且治疗难度更大,其中由于组织修复困难而成为代表性的难愈性创伤,是放创复合伤致死致残的重要原因。创面损伤修复是一个复杂连续的生物学过程,而复合伤组织修复不仅是单纯的局部创面愈合过程,而且受到全身反应的影响和调节,能够明显的加重损伤的程度,并且延长愈合的时间。遗憾的是,在目前并没有针对放创复合伤的理想的治疗方法。现代医学中在各种疾病,包括血液性、免疫疾病、严重烧伤以及肿瘤等的治疗中都采用过基于干细胞的治疗手段,这种特殊的治疗方法为放创复合伤的治疗也开辟了新的思路。干细胞治疗在目前是一种新兴的治疗手段,但因其所具有的高效性和靶向性,仍具有良好的研究及治疗前景。然而细胞来源成为了干细胞治疗中存在的一个最突出的问题。近几十年的干细胞研究从基础逐渐进入到临床,早期结果也十分令人鼓舞。在细胞治疗领域,我国科学家已紧紧跟上了国际前沿技术的脚步,在某些领域,其研究已经达到了世界领先的水平。干细胞是几乎所有的成体组织中都存在的一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞。在目前发现的多种干细胞群中,胚胎干细胞在伦理方面存在着很大的负面影响,而广受关注iPS细胞也具有一定的安全隐患,因此,成体干细胞在治疗应用中最具有可行性。自体或异体骨髓来源的间充质干细胞是成体干细胞中在基础实验和临床中应用最为广泛的一种。众所周知,淋巴造血系统的细胞对辐射具有很高的敏感性,在受到辐照后很容易造成致死性的伤害,这就是说,对放创复合伤患者来讲,骨髓细胞并不是自体细胞治疗中最理想的细胞来源,也说明我们急需探索其他细胞来源。皮肤是人体中最大的器官,由上皮组织和和真皮组织组成,包括来源于三个胚层的多种不同的组织细胞,自我更新和再生修复速度快,是成体干细胞分离和研究的良好对象。在近几十年来,研究者们开始越来越关注真皮细胞在创伤修复和其他皮肤疾病中所起到的重要作用。作为最表浅的部位,我们也能通过简易的途径获得大量的细胞。本课题组早在2001年就成功分离和培养出了大鼠真皮多能间充质干细胞,并证明了其具有良好的自我增殖及诱导分化的生物学特性。目前,肉芽组织来源的细胞因其在组织修复中的重要治疗效应而被看作是一个充足的细胞来源,在近两年的工作中我们也进一步研究了创面肉芽中分离出的间充质干细胞在创面治疗中发挥的治疗效果。由于皮肤对放射敏感性相对较低,而放创复合伤肉芽组织来源细胞的生物学特性尚未见系统研究,因此,我们提出这样一个推测,放创复合伤肉芽来源的细胞能够保持良好的生物学特性,并作为重要的自体细胞移植治疗的细胞来源。在本课题中,我们探讨了复合伤肉芽组织来源细胞的一些重要特性,其中多种涉及到放射敏感性的生物学特性由骨髓来源细胞、新生鼠真皮细胞以及单创肉芽组织来源细胞作为对照进行研究。根据实验结果我们得出以下一些结论:1.放射损伤能明显延长创面的修复过程,通过比较单创和复合伤肉芽中Ki67阳性细胞和新生血管的数量,发现延迟愈合时间大概在2～3天。2.采用骨髓来源细胞作为对照评估复合伤肉芽组织细胞的体外培养特性和自我增殖能力,发现骨髓来源细胞对放射损伤具有很高的敏感性,在经照射后细胞出现明显衰老损伤现象,而肉芽来源细胞能够保持较好的细胞活力及体外增殖能力,提示肉芽来源细胞具有明显的体外扩增优势。3.通过比较分离的复合伤肉芽来源细胞、单创肉芽来源细胞和新生鼠真皮细胞与干细胞有关的生物学特性,发现放创复合伤肉芽细胞和另两组细胞具有较为一致的增殖能力、迁移能力和粘附能力,虽然在集落形成和诱导分化能力中有一定程度减弱,但仍然保持在一个较高的水平,进一步支持复合伤肉芽组织细胞能够保持较好的生物学功能。4.通过在创面局部注射分离培养的复合伤肉芽来源细胞,并观察创面愈合、细胞定植以及创面瘢痕愈合情况,证明复合伤肉芽组织细胞对创面修复能够发挥促进作用。另外,配制复合伤肉芽细胞培养上清的条件培养基对细胞生长情况产生的影响,验证了肉芽细胞对人皮肤来源的细胞具有促增殖的作用。
文内图片：

图片说明：图１放创复合伤和单纯创伤创面愈合情况观察逡逑为了能够定量分析复合伤和单创后创面的愈合情况，，我们对两组创面进行拍照，逡逑并运用Ｉｍａｇｅ邋Ｊ软件对两组创面的残余面积进行计算。由统计学分析结果可以得出，逡逑在伤后第１天，两组创面都处于轻微收缩的状态，残余面积无明显差异。在创伤第３逡逑天开始，两组创面都出现了明显的修复迹象，但单创组的创面愈合情况明显优于复合逡逑伤组，复合伤组的愈合时间较单创组更为延后。由此，我们可以明确，放射损伤对创逡逑面愈合有明显的延迟作用。逡逑ｇ邋１５0＿逦ｔ＝３邋ＳＩ逡逑Ｖ逦■邋ＣＲＷＩ逡逑１邋ｉｏｏｎｉＩｉ邋＊逡逑
文内图片：图２放创复合伤（ＣＲＷＩ）和单纯创伤（ＳＩ）愈合创面面积分析逡逑

图片说明：图１放创复合伤和单纯创伤创面愈合情况观察逡逑够定量分析复合伤和单创后创面的愈合情况，我们对两组创面进ｇｅ邋Ｊ软件对两组创面的残余面积进行计算。由统计学分析结果可天，两组创面都处于轻微收缩的状态，残余面积无明显差异。在组创面都出现了明显的修复迹象，但单创组的创面愈合情况明显伤组的愈合时间较单创组更为延后。由此，我们可以明确，放射显的延迟作用。逡逑＿
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R641

【参考文献】