NF-κB在急性肝损伤大鼠卵原细胞增殖和分化中的作用及黄芩苷的调节机制

发布时间：2019-11-22 04:41

【摘要】：卵圆细胞（haptic oval cell,HOC）是肝脏的干细胞，具有多项分化潜能。肝脏具有强大的再生修复能力，只有当损伤严重，肝细胞增殖受到抑制时，卵圆细胞被激活参与肝脏损伤修复的过程，可增殖分化为肝细胞和胆管细胞，但卵圆细胞的过度增殖又有可能引发癌变，认识调控卵圆细胞增殖分化的机制并加以干预是临床上治疗肝损伤的基础。NF-κB是一种重要的核转录因子，在肝损伤中可被多种因素激活，参与多种炎症因子的转录调节，在卵圆细胞激活过程中起重要作用，NF-κB信号传导通路可能成为药物治疗肝损伤的靶点。急性肝损伤可由多种原因造成，例如酒精中毒、病毒感染、药物、毒物等。氧化应激是造成肝损伤的主要机制，损伤过程中有多种因子的参与，，活性氧（Reactive oxygen species，ROS）、内皮素-1（ET-1）等产生增多，作用于NF-κB，使致炎因子的表达和释放增加，产生炎症反应。黄芩苷是从传统中药黄芩中提取的有效成分，属于黄酮类化合物，已被证实具有抗炎、抗氧化、抑制细菌、清除氧自由基等生理作用。近年来的研究表明,黄芩苷对肝脏有保护作用。但其具体的机制尚不清楚，是否作用于NF-κB，并对卵圆细胞有调节作用，本文将对其进行初步研究。目的：通过建立2-AAF+2/3PH急性肝损伤模型，诱导卵圆细胞增殖，研究在卵圆细胞增殖分化过程中NF-κB的作用，并应用黄芩苷进行干预，同时探讨黄芩苷对肝脏保护作用的机制。方法：将健康成年SD大鼠，雌雄不限，体重200g±20g，随机分为四组，分别为假手术组（A）、模型组(B)、黄芩苷低剂量组(C)及黄芩苷高剂量组(D)。采用2-乙酰氨基芴+2/3肝切除术(2-acetylaminofluorene+twothirds partial hepatectomy，2-AAF+2/3PH)的方法建立卵圆细胞增殖模型。模型组大鼠先每天给予15mg/kg的2-AAF灌胃4天，第5天行2/3肝切除，然后继续以原剂量灌胃5天。假手术组大鼠正常饮食，只在第5天行腹部的切开与缝合，不切除肝脏。黄芩苷干预组大鼠在2-AAF灌胃的同时灌胃黄芩苷溶液，黄芩苷低剂量组应用50mg/kg/d、高剂量组100mg/kg/d，余同模型组，术后继续给予黄芩苷灌胃直至处死。各组大鼠于手术后第1、7、14、21天分别处死4只大鼠并取材。组织处理后行HE染色观察大鼠肝组织病理学表现；电镜下观察辨认卵圆细胞的超微结构；免疫荧光技术检测肝组织中OV6表达以观察HOC增殖情况并对其进行定量分析；免疫组化检测c-kit、AFP、CK19的表达来观察HOC的分化情况；分别应用RT-PCR法和Western Blotting检测NF-κB表达；并检测血清中MDA、H2O2和ET-1的变化。结果：①肝组织病理形态学变化：HE染色显示，假手术组肝组织形态结构正常，未见卵圆细胞，模型组可见肝细胞水肿，排列紊乱，于汇管区周围可见卵圆细胞，黄芩苷处理组炎症较模型组减轻、卵圆细胞减少，其中黄芩苷高剂量组变化更明显。②电镜下可见卵圆细胞体积较小,直径7-10μm左右,胞浆少，细胞核相对大,核质比高,胞质内主要为游离核糖体及少量粗面内质网和线粒体,张力微丝束明显可见。③卵圆细胞增殖分化情况：OV6、AFP、CK19、c-kit的表达随时间变化在假手术组无明显变化，在模型组大鼠肝切除术后第7-14天增加明显，第14天达到峰值，之后下降，各组间的表达有差别（P0.05）。较模型组，黄芩苷干预组OV6表达偏低（P0.05），且高剂量组较低剂量组降低更明显（P0.05），表明黄芩苷抑制肝卵圆细胞增殖；c-kit、AFP表达略偏低（P0.05），CK19表达偏高（P0.05），表明黄芩苷影响卵圆细胞分化。④NF-κB的检测：RT-PCR和Western Blotting均显示，NF-κB的表达随时间而变化，在第14天时达高峰，之后下降，趋势与卵圆细胞增殖一致。黄芩苷干预组NF-κB的表达降低，并且黄芩苷高剂量组降低更明显，各组间差异有统计学意义（P0.05）。⑤血清学指标：与对照组相比，模型组的MDA、H2O2和ET-1均升高（P0.05），黄芩苷干预组较模型组减低，高剂量组降低更明显（P0.05）。结论：卵圆细胞的增殖和分化与NF-κB的激活有关。黄芩苷可通过抑制NF-κB信号传导通路，从而抑制卵圆细胞的增殖，并诱导增殖的卵圆细胞向成熟的肝细胞及胆管细胞分化，这可能是黄芩苷对肝脏保护作用及促进肝再生的机制。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R657.3

【引证文献】