LXRs通过泛素化途径降解p65 NF-κB作用机制

发布时间：2020-05-13 01:57

【摘要】：目的:本研究主要探讨肝X受体(Liver X Receptors,LXRs)对LPS诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞p65 NF-κB的影响,并进一步探讨其可能机制。方法:本实验我们采用RAW264.7细胞作为研究对象,以LPS诱导的RAW264.7细胞为炎症模型,观察LXRs配体预处理巨噬细胞对p65 NF-κB表达和多聚泛素化水平的影响。用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)阻断p65 NF-κB蛋白的合成,分析LXR配体是否影响p65 NF-κB蛋白的稳定性。通过western blot和PCR技术观察LXRs配体对SOCS1基因和蛋白的表达情况。然后通过采用siRNA干扰技术进行细胞转染,沉默RAW264.7细胞内SOCS1表达后,观察LXRs配体对LPS诱导的巨噬细胞中SOCS1、p65 NF-κB蛋白表达以及p65 NF-κB多聚泛素化水平的影响。结果:LXRs配体预处理能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中p65 NF-κB蛋白的表达,并且也能显著上调E3连接酶SOCS1mRNA和蛋白的表达。蛋白酶体抑制剂MG132阻断泛素化途径时,T0901317能够促进p65 NF-κB的泛素化和泛素化降解。SOCS1siRNA转染至RAW264.7细胞阻断SOCS1的表达,明显抑制T0901317诱导的p65 NF-κB泛素化和泛素化降解。结论:LXRs配体预处理能够明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞p65 NF-κB蛋白表达,这可能是LXRs通过SOCS1介导的泛素化途径下调p65 NF-κB水平。
【图文】：

表达水平,转录后水平,预处理

T0901317 预处理不影响 p65 mRNA 的表达；Western blot 结果表明（图 4.2），LPS 促进 p65 蛋白的表达，与 LPS 组相比，T0901317 预处理明显抑制 LPS 诱导的 p65 表达。结果表明，T0901317 在转录后水平影响 p65 蛋白的表达。

亚胺环己酮,蛋白表达,细胞内,蛋白质合成抑制剂

图 4.2 不同因素处理 RAW264.7 小鼠巨噬细胞 p65 NF-κB 蛋白的表达水平*p<0.054.2 观察 T0901317 对 RAW264.7 细胞 p65 NF-κB 蛋白稳定性的影响接下来分析 LXRs 是否影响 p65 NF-κB 蛋白的稳定性，采用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)阻断 p65 NF-κB 蛋白的合成。将 LXRs 配体预处理RAW264.7 小鼠巨噬细胞 12 h，然后用 50μg/ml 的亚胺环己酮(CHX)处理 0，2，4 和 8h，Western blot 检测细胞内 p65 NF-κB 蛋白表达，通过计算细胞内残余p65 NF-κB 量，半定量分析其稳定性。结果表明（图 4.3），LPS 组在 CHX 处理2，，4 和 8 小时后，p65 蛋白表达有所减少；与 LPS 组相比，T0901317 组在 CHX处理 2，4 和 8 小时后，p65 蛋白表达明显减少。结果表明，T0901317 预处理能
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7

【参考文献】