单核细胞在缺氧复氧条件下促进人肺微血管内皮细胞焦亡

发布时间：2020-07-17 09:57

【摘要】：目的:在缺氧复氧条件下共培养单核细胞和人肺微血管内皮细胞(HPMEC),探索单核细胞对HPMEC发生细胞焦亡的影响及相关机制。方法:Part Ⅰ:检测单核细胞在缺氧复氧条件下分泌炎症因子的种类、数量;选择单核细胞经NLRP3和TLR2炎性通路介导炎症的表达情况,选取变化较大炎性通路为后续实验干预对象。Part Ⅱ:设置共培养单核细胞和HPMEC以及单独培养HPMEC,给与或不给与缺氧复氧干预四组实验。实验组为共培养单核细胞和HPMEC,予以缺氧复氧处理。各组实验分别在开始处理后8h(复氧5h)和24h(复氧21h)后检测各组HPMEC和其上清液中细胞焦亡指标caspase-1、IL-1β和IL-18表达情况。Part Ⅲ:根据Part Ⅰ实验结果,选取经NLRP3的目标炎性通路。设置敲低单核细胞NLRP3基因或抑制HPMEC细胞内caspase-1活性后两组细胞共培养实验,并分别建立对照组,予以缺氧3h后复氧1h处理。随后同Part Ⅱ检测各时间点HPMEC焦亡指标。结果:单核细胞和HPMEC共培养,在缺氧复氧后,HPMEC活性明显降低、释放更多LDH和分泌及表达IL-1β、IL-18、caspase-1明显增加,结果具有统计学意义。并且与复氧后时间呈轻度正相关。敲减单核细胞中NLRP3基因或抑制HPMEC细胞内caspase-1后共培养,在缺氧复氧后,HPMEC活性明显增加、释放LDH减少;分泌和表达IL-1β、IL-18、caspase-1明显减少,结果具有统计学意义。结论:在缺氧复氧条件下,单核细胞能够增加HPMEC发生细胞焦亡的程度。其发生机制可能与单核细胞分泌的炎性因子,如IL-1β、IL-18作用于HPMEC和(或)单核细胞自身细胞焦亡,促进HPMEC发生细胞焦亡有相关。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R655.3
【图文】：

图 1 各组细胞中 NLRP3、TLR2 的蛋白表达图U937 为 U937 细胞不做处理组；U937+H/R-8h 为 U937 细胞缺氧 3h 复氧 1h，开始处理因素 8h（复氧 5h 后）后；U937+H/R-24h 为 U937 细胞缺氧 3h 复氧 1h，开始处理因素 24h（复氧 24h 后）后。THP-1 为 THP-1 细胞不做处理组；THP-1+H/R-8h为THP-1细胞缺氧3h复氧1h，开始处理因素8（h复氧5h后）后；THP-1+H/R-24h为 THP-1 细胞缺氧 3h 复氧 1h，开始处理因素 24h（复氧 24h 后）后。表 1 各组细胞中 NLRP3、TLR2 的蛋白灰度分析2、Elisa 试剂分别检测 THP-1 和 U937 细胞上清 IL-1β、IL-18、IL-6、IL-8、TNF-α 的表达

THP-1、U937细胞上清的IL-1β、IL-18浓度

THP-1、U937细胞上清的IL-6、IL-8及TNF-α浓度

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本文编号：2759287