沙海蜇毒素金属蛋白酶致炎作用研究
发布时间：2020-08-13 11:49
【摘要】：近年来,随着海洋环境变化和人类生产生活等的影响,导致水母在世界范围内暴发的现象频繁发生,水母蜇伤已成为人们重点关注的公共安全问题之一。水母皮炎是水母蜇伤后的主要临床反应,炎症反应伴随了水母皮炎的整个过程,严重影响了人们的日常生活和健康。由于水母毒素成分的复杂多样,使得至今未能有治疗水母皮炎的有效药物。通过对水母毒素的组学研究,表明水母毒素中含有丰富的金属蛋白酶成分,研究表明,金属蛋白酶成分在陆生动物的毒液中发挥了重要的作用。因此,本文以中国常见的大型蜇人水母—沙海蜇为研究对象,分别从体外和体内层面,通过基质金属蛋白酶抑制剂对毒素诱导的炎症反应的抑制作用,研究了金属蛋白酶对水母皮炎的生物学效应,主要结果如下:1.体外水平的研究表明,沙海蜇毒素能够显著降低细胞的存活率,并且能通过促进细胞凋亡导致细胞死亡;毒素作用于两种皮肤细胞和两种炎症模型细胞时,细胞中的三种炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α的基因表达水平和蛋白表达水平都显著增高,说明毒素能够刺激细胞产生炎症反应。当金属蛋白酶抑制剂BMT和EDTA与沙海蜇毒素反应后,能够显著降低毒素对细胞的毒性作用,提高细胞的存活率,细胞中的炎症因子的含量也显著下降。说明沙海蜇毒素中的金属蛋白酶在炎症的发生过程中起重要作用。2.体内研究表明,沙海蜇毒素能够刺激小鼠体内两种炎症细胞-淋巴细胞和白细胞的产生,以及三种炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α的表达显著增加。皮肤组织病理切片表明沙海蜇毒素导致小鼠皮肤组织中炎症细胞的含量明显增多;而金属蛋白酶抑制剂与毒素作用后,皮肤组织中炎症细胞的含量减少,表明沙海蜇毒素中金属蛋白酶具有致炎作用。3.沙海蜇毒素的肌肉毒性实验表明,沙海蜇毒素能够导致机体中乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性的显著升高,可能会造成肌肉组织损伤,而金属蛋白酶抑制剂作用后的毒素对机体中乳酸脱氢酶和肌酸激酶的活性显著降低,说明金属蛋白酶在沙海蜇毒素的肌肉毒性中发挥了重要作用。
【学位授予单位】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R646
【图文】：
然后向试管中加入０．５邋ｍＬ的福林酚乙液，摇匀后放置３０邋ｍｉｎ。反应都在室温条逡逑件下进行，每组设定三个平行。然后用不含ＢＳＡ的空白管调零，用分光光度计逡逑测定每管溶液在５００邋ｎｍ处的吸光值（Ｏ．Ｄ５0Ｇｎｍ）。绘制如图２．１所示的蛋白浓度逡逑标准曲线，通过待测样的吸光值即可求出沙海蜇毒素中的蛋白浓度。逡逑０．３逡逑０．２５逡逑Ｉ＂逡逑Ｇ邋＇逦７邋Ｙ邋＝邋０．００１邋＊Ｘ＋０．０００８逡逑６逡逑０１逦Ｒ２邋＝邋０．９９９１逡逑０．０５逦ｊＴ逡逑ｏｋ－逦逡逑０逦５０逦１００逦１５０逦２００逦２５０逦３００逡逑Ｐｒｏｔｅｉｎ邋Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（卩ｇ／ｍＬ）逡逑图２．１邋ＢＳＡ蛋白标准曲线逡逑Ｆｉｇ．邋２．１邋Ｔｈｅ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＢＳＡ邋ｓｔａｎｄａｒｄ逡逑２．邋１．２．４细胞培养逡逑丨）溶液配制：逡逑细胞培养基：逡逑人角质形成细胞ＨａＣａＴ培养基：添加］０邋％胎牛血清的ＭＥＭ－ＥＢＳＳ培养基；逡逑人胚胎成纤维细胞ＣＣＣ－ＥＳＦ－１培养基：添加
逑少而无法收集，因此，选择细胞存活率在５０％－６０％的沙海蜇毒素浓度进行后续逡逑金属蛋白酶抑制剂的细胞实验，由图２．２的结果可知，浓度为５０邋ｉｉｇ／ｍＬ。逡逑■邋ＨａＣａＴ逡逑１２０邋ｎ逦ＣＣＣ－ＥＳＦ－１逡逑ＲＡＷ邋２６４．７逡逑ＨＵＶＥＣ逡逑１00邋－逦－邋Ｔ邋Ｉ邋ｔ逡逑ｔＴｔ逡逑＇ｔＴｔ逡逑Ｔ邋丁逦＊逡逑孑邋８。－逦Ｔ邋＊邋Ｔ逡逑５逦＊Ｔ逡逑６0邋＿逦＊＊＊＊邋Ｔ逡逑１逦－ｒ逡逑＾逦ｉｒｋ逡逑Ｃ逦＊＊邋Ｔ逡逑３逦４0邋．逦＊＊ｔ邋Ｉ逡逑（ｆ）逦４Ｕ逦｜逡逑２0－逦｜邋＊＊＊逡逑上逡逑ｕ邋￣￣ｉ逦ｉ逦ｉ逦ｒ逦—ｉ逦＼逡逑０逦５逦１０逦１５逦２５逦５０逦１００逡逑ＮｎＮＶ邋Ｄｏｓｅ邋（ｐｇ／ｍＬ）逡逑图２．２沙海蜇毒素对细胞存活率的影响逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＮｎＮＶ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌｓ逡逑２．邋１．３．２细胞凋亡逡逑细胞凋亡是细胞程序性死亡的一种模式，能够调节细胞功能以维持生物体内逡逑环境的稳定（Ｅｌｍｏｒｅ，２０丨７），但是，大量的细胞凋亡不仅会阻碍细胞间的交流与逡逑合作，也会导致内环境的紊乱，影响生物体的机体平衡。近几年一些研究表明水逡逑母毒素可以通过促进癌细胞凋亡从而诱导癌细胞死亡（Ｈａ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０Ｉ７；邋Ｑｕ邋ｅｔ邋ａｌ．，逡逑２０１６），具有潜在的抗癌活性，但是很少有水母毒素诱导皮肤细胞凋亡的研究。逡逑图２．２的结果表明沙海蜇毒素能够促进细胞大量死亡
逑少而无法收集，因此，选择细胞存活率在５０％－６０％的沙海蜇毒素浓度进行后续逡逑金属蛋白酶抑制剂的细胞实验，由图２．２的结果可知，浓度为５０邋ｉｉｇ／ｍＬ。逡逑■邋ＨａＣａＴ逡逑１２０邋ｎ逦ＣＣＣ－ＥＳＦ－１逡逑ＲＡＷ邋２６４．７逡逑ＨＵＶＥＣ逡逑１00邋－逦－邋Ｔ邋Ｉ邋ｔ逡逑ｔＴｔ逡逑＇ｔＴｔ逡逑Ｔ邋丁逦＊逡逑孑邋８。－逦Ｔ邋＊邋Ｔ逡逑５逦＊Ｔ逡逑６0邋＿逦＊＊＊＊邋Ｔ逡逑１逦－ｒ逡逑＾逦ｉｒｋ逡逑Ｃ逦＊＊邋Ｔ逡逑３逦４0邋．逦＊＊ｔ邋Ｉ逡逑（ｆ）逦４Ｕ逦｜逡逑２0－逦｜邋＊＊＊逡逑上逡逑ｕ邋￣￣ｉ逦ｉ逦ｉ逦ｒ逦—ｉ逦＼逡逑０逦５逦１０逦１５逦２５逦５０逦１００逡逑ＮｎＮＶ邋Ｄｏｓｅ邋（ｐｇ／ｍＬ）逡逑图２．２沙海蜇毒素对细胞存活率的影响逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＮｎＮＶ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌｓ逡逑２．邋１．３．２细胞凋亡逡逑细胞凋亡是细胞程序性死亡的一种模式，能够调节细胞功能以维持生物体内逡逑环境的稳定（Ｅｌｍｏｒｅ，２０丨７），但是，大量的细胞凋亡不仅会阻碍细胞间的交流与逡逑合作，也会导致内环境的紊乱，影响生物体的机体平衡。近几年一些研究表明水逡逑母毒素可以通过促进癌细胞凋亡从而诱导癌细胞死亡（Ｈａ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０Ｉ７；邋Ｑｕ邋ｅｔ邋ａｌ．，逡逑２０１６），具有潜在的抗癌活性，但是很少有水母毒素诱导皮肤细胞凋亡的研究。逡逑图２．２的结果表明沙海蜇毒素能够促进细胞大量死亡
本文编号：2791961
【学位授予单位】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R646
【图文】：
然后向试管中加入０．５邋ｍＬ的福林酚乙液，摇匀后放置３０邋ｍｉｎ。反应都在室温条逡逑件下进行，每组设定三个平行。然后用不含ＢＳＡ的空白管调零，用分光光度计逡逑测定每管溶液在５００邋ｎｍ处的吸光值（Ｏ．Ｄ５0Ｇｎｍ）。绘制如图２．１所示的蛋白浓度逡逑标准曲线，通过待测样的吸光值即可求出沙海蜇毒素中的蛋白浓度。逡逑０．３逡逑０．２５逡逑Ｉ＂逡逑Ｇ邋＇逦７邋Ｙ邋＝邋０．００１邋＊Ｘ＋０．０００８逡逑６逡逑０１逦Ｒ２邋＝邋０．９９９１逡逑０．０５逦ｊＴ逡逑ｏｋ－逦逡逑０逦５０逦１００逦１５０逦２００逦２５０逦３００逡逑Ｐｒｏｔｅｉｎ邋Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（卩ｇ／ｍＬ）逡逑图２．１邋ＢＳＡ蛋白标准曲线逡逑Ｆｉｇ．邋２．１邋Ｔｈｅ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＢＳＡ邋ｓｔａｎｄａｒｄ逡逑２．邋１．２．４细胞培养逡逑丨）溶液配制：逡逑细胞培养基：逡逑人角质形成细胞ＨａＣａＴ培养基：添加］０邋％胎牛血清的ＭＥＭ－ＥＢＳＳ培养基；逡逑人胚胎成纤维细胞ＣＣＣ－ＥＳＦ－１培养基：添加
逑少而无法收集，因此，选择细胞存活率在５０％－６０％的沙海蜇毒素浓度进行后续逡逑金属蛋白酶抑制剂的细胞实验，由图２．２的结果可知，浓度为５０邋ｉｉｇ／ｍＬ。逡逑■邋ＨａＣａＴ逡逑１２０邋ｎ逦ＣＣＣ－ＥＳＦ－１逡逑ＲＡＷ邋２６４．７逡逑ＨＵＶＥＣ逡逑１00邋－逦－邋Ｔ邋Ｉ邋ｔ逡逑ｔＴｔ逡逑＇ｔＴｔ逡逑Ｔ邋丁逦＊逡逑孑邋８。－逦Ｔ邋＊邋Ｔ逡逑５逦＊Ｔ逡逑６0邋＿逦＊＊＊＊邋Ｔ逡逑１逦－ｒ逡逑＾逦ｉｒｋ逡逑Ｃ逦＊＊邋Ｔ逡逑３逦４0邋．逦＊＊ｔ邋Ｉ逡逑（ｆ）逦４Ｕ逦｜逡逑２0－逦｜邋＊＊＊逡逑上逡逑ｕ邋￣￣ｉ逦ｉ逦ｉ逦ｒ逦—ｉ逦＼逡逑０逦５逦１０逦１５逦２５逦５０逦１００逡逑ＮｎＮＶ邋Ｄｏｓｅ邋（ｐｇ／ｍＬ）逡逑图２．２沙海蜇毒素对细胞存活率的影响逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＮｎＮＶ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌｓ逡逑２．邋１．３．２细胞凋亡逡逑细胞凋亡是细胞程序性死亡的一种模式，能够调节细胞功能以维持生物体内逡逑环境的稳定（Ｅｌｍｏｒｅ，２０丨７），但是，大量的细胞凋亡不仅会阻碍细胞间的交流与逡逑合作，也会导致内环境的紊乱，影响生物体的机体平衡。近几年一些研究表明水逡逑母毒素可以通过促进癌细胞凋亡从而诱导癌细胞死亡（Ｈａ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０Ｉ７；邋Ｑｕ邋ｅｔ邋ａｌ．，逡逑２０１６），具有潜在的抗癌活性，但是很少有水母毒素诱导皮肤细胞凋亡的研究。逡逑图２．２的结果表明沙海蜇毒素能够促进细胞大量死亡
逑少而无法收集，因此，选择细胞存活率在５０％－６０％的沙海蜇毒素浓度进行后续逡逑金属蛋白酶抑制剂的细胞实验，由图２．２的结果可知，浓度为５０邋ｉｉｇ／ｍＬ。逡逑■邋ＨａＣａＴ逡逑１２０邋ｎ逦ＣＣＣ－ＥＳＦ－１逡逑ＲＡＷ邋２６４．７逡逑ＨＵＶＥＣ逡逑１00邋－逦－邋Ｔ邋Ｉ邋ｔ逡逑ｔＴｔ逡逑＇ｔＴｔ逡逑Ｔ邋丁逦＊逡逑孑邋８。－逦Ｔ邋＊邋Ｔ逡逑５逦＊Ｔ逡逑６0邋＿逦＊＊＊＊邋Ｔ逡逑１逦－ｒ逡逑＾逦ｉｒｋ逡逑Ｃ逦＊＊邋Ｔ逡逑３逦４0邋．逦＊＊ｔ邋Ｉ逡逑（ｆ）逦４Ｕ逦｜逡逑２0－逦｜邋＊＊＊逡逑上逡逑ｕ邋￣￣ｉ逦ｉ逦ｉ逦ｒ逦—ｉ逦＼逡逑０逦５逦１０逦１５逦２５逦５０逦１００逡逑ＮｎＮＶ邋Ｄｏｓｅ邋（ｐｇ／ｍＬ）逡逑图２．２沙海蜇毒素对细胞存活率的影响逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＮｎＮＶ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌｓ逡逑２．邋１．３．２细胞凋亡逡逑细胞凋亡是细胞程序性死亡的一种模式，能够调节细胞功能以维持生物体内逡逑环境的稳定（Ｅｌｍｏｒｅ，２０丨７），但是，大量的细胞凋亡不仅会阻碍细胞间的交流与逡逑合作，也会导致内环境的紊乱，影响生物体的机体平衡。近几年一些研究表明水逡逑母毒素可以通过促进癌细胞凋亡从而诱导癌细胞死亡（Ｈａ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０Ｉ７；邋Ｑｕ邋ｅｔ邋ａｌ．，逡逑２０１６），具有潜在的抗癌活性，但是很少有水母毒素诱导皮肤细胞凋亡的研究。逡逑图２．２的结果表明沙海蜇毒素能够促进细胞大量死亡
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 刘萍;张学雷;宋洪军;庞敏;;我国海域常见有毒水母的分类检索[J];海洋科学进展;2013年02期
2 洪惠馨,李福振,林利民,应敏;我国常见的有毒海洋腔肠动物[J];集美大学学报(自然科学版);2004年01期
本文编号：2791961
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jjyx/2791961.html
最近更新
教材专著
