非选择性与选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂对急性百草枯中毒大鼠炎症反应的比较研究

发布时间：2020-08-21 16:08

【摘要】：目的:急性百草枯(Paraquat,PQ)中毒是急诊科常见的急危重症之一,因其尚无特效解毒剂,故具有高病死率。肺是主要作用的靶器官,早期出现的急性呼吸窘迫综合征和晚期出现的肺间质纤维化均可造成呼吸衰竭导致死亡。PQ的主要作用机制为直接氧化损伤相关组织,促进相关组织产生活性氧并不断刺激炎症细胞分泌各种炎症介质,诱导过度炎症反应出现全身炎症反应综合征(SIRS)。SIRS后可出现以淋巴细胞减少为特征的免疫抑制状态,被称为代偿性抗炎反应综合征(CARS)。SIRS和CARS均可导致多器官功能障碍引起死亡。组蛋白去乙酰化酶(HDAC)是维持组蛋白乙酰化的关键酶。HDAC抑制剂(HDACI)可抑制组蛋白去乙酰化,持续暴露基因的转录位点,上调基因转录,抑制炎症反应并促进细胞生存。本研究通过构建急性PQ中毒大鼠模型,比较非选择性和选择性HDACI对急性PQ中毒大鼠炎症反应的影响。研究方法:将24只雌性Wistar大鼠随机分为8组,实验组给予100mg/kg的PQ灌胃、对照组给予1ml/100g的生理盐水(NS)灌胃,具体分组如下:(1)NS灌胃+(NS+DMSO)腹腔注射;(2)NS灌胃+(VPA+DMSO)腹腔注射;(3)NS灌胃+(MC1568+NS)腹腔注射;(4)NS灌胃+(Apicidin+NS)腹腔注射;(5)PQ灌胃+(NS+DMSO)腹腔注射;(6)PQ灌胃+(VPA+DMSO)腹腔注射;(7)PQ灌胃+(MC1568+NS)腹腔注射;(8)PQ灌胃+(Apicidin+NS)腹腔注射。灌胃30分钟后通过腹腔注射分别给予对应组别250mg/kg的VPA(非选择性Ⅰ类和Ⅱa类HDACI)、1mg/kg的Apicidin(选择性Ⅰ类HDACI)和5mg/kg的MC1568(选择性Ⅱa类HDACI)。灌胃72小时后戊巴比妥钠麻醉大鼠,腹主动脉采血,检测大鼠动脉血气、血常规和凝血等指标,评估肺脏功能及全身炎症反应状态。观察大鼠肺脏大体形态学改变,收集左肺支气管灌洗液(BALF),右肺行HE染色和湿/干比(W/D),评估肺泡出血、水肿等损伤程度。ELISA方法检测BALF及血清中TNF-α和IL-10,分析细胞因子水平,评估大鼠全身和肺脏的炎症反应强度。结果:给予PQ灌胃的所有大鼠均表现出不同程度的饮食饮水减少、喜团聚、活动减少、呼吸急促等中毒表现,而给予NS灌胃组的大鼠均无上述表现;PQ灌胃72小时后,中毒大鼠出现动脉血氧分压下降,二氧化碳分压上升等表现。肺组织可见出血和血肿,W/D增高,光学显微镜下可见肺泡间隔增厚、血细胞和炎性细胞浸润。中毒大鼠血清白细胞、淋巴细胞明显减少,提示中毒大鼠已处于免疫抑制状态。VPA可升高PQ中毒大鼠动脉血氧分压和血PH值,降低二氧化碳分压;同时VPA减轻了PQ中毒大鼠的肺组织出血和血肿,降低了肺W/D,光学显微镜下可见其减轻了因PQ中毒导致的肺泡间隔增厚以及血细胞和炎性细胞的浸润。另外,VPA可降低因PQ中毒导致的大鼠血清白细胞、淋巴细胞的减少程度。结论:急性PQ中毒大鼠过度炎症反应可继发代偿性抗炎反应免疫抑制状态。VPA可以削弱急性PQ中毒大鼠的代偿性抗炎反应免疫抑制状态,使机体的免疫系统趋于相对稳定状态。MC1568和Apicidin并没有明显改善PQ中毒大鼠免疫抑制状态的功能。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R595.4

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