BET抑制剂（+）-JQ1通过调节NF-KB信号通路保护小鼠急性肝衰竭实验研究
发布时间：2021-08-30 14:53
目的探讨溴结构域和额外末端结构域（BET）抑制剂（+）-JQ1对脂多糖/D-氨基半乳糖（LPS/D-Gal）诱导的小鼠急性肝衰竭（ALF）的保护作用及其作用机制。方法将47只C57BL/6小鼠随机分为对照组（n=15）、模型组（n=17）和（+）-JQ1干预组（n=15）,采用腹腔注射LPS/D-Gal联合诱导ALF模型,其中在干预组造模前2 h腹腔注射（+）-JQ1。在造模4 h后每组处死5只小鼠,其余小鼠继续喂养至72 h,观察存活率。采用ELISA法检测血清TNF-α,采用RT-q PCR法和Western bloting法分别检测mRNA和蛋白表达。结果模型组72 h小鼠存活率为16.7%（2/12）,（+）-JQ1干预组为60.0%（6/10,P>0.05）; ALF组血清ALT水平为（2779.0±200.6） U/L,显著高于对照组【（44.9±2.5） U/L,P<0.05】,血清AST水平为（2885.0±143.6） U/L,显著高于对照组【76.0±5.7) U/L,P<0.05】,而（+）-JQ1干预组血清ALT和AST水平较模型组显著降低【分...
【文章来源】：实用肝脏病杂志. 2020,23(06)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
各组小鼠肝脏大体观
各组小鼠肝组织病理学表现(HE,100×)
ALF是一种少见但病死率很高的临床疾病，可由多种因素导致。由于肝衰竭导致脑、肾、肺和心等功能衰竭，病情凶险。不论哪种病因均伴有肝内炎症细胞浸润，体内炎症反应过强或过弱均会给机体带来不良的影响[6-8]。ALF时过度激活的炎症反应可导致肝细胞坏死，加重肝脏损伤。当肝脏内细胞坏死和细胞再生无法达到平衡时则会发生ALF[9]。因此，精密调节炎症反应对疾病的控制至关重要[10-13]。有研究表明，BET蛋白在巨噬细胞释放促炎细胞因子过程中起到关键性作用，而其抑制剂(+)-JQ1可以有效地抑制过度激活的炎症反应[14-16]。经腹腔联合注射LPS/D-Gal诱导小鼠ALF是经典的ALF模型。LPS是革兰氏阴性菌的主要成分，它主要通过作用于肝脏枯否细胞来诱导肝损伤。LPS可刺激枯否细胞大量释放多种促炎细胞因子，包括TNF-α、IL-6和IL-1B，诱导ALF小鼠肝细胞坏死和凋亡。血清ALT和AST是肝脏损伤的重要标志。ALF患者血清ALT和AST会明显升高。在本实验中我们观察到ALF小鼠血清ALT和AST水平明显升高，而且促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B水平也明显升高，肝脏组织学表现为肝脏组织明显受损，证实ALF小鼠模型制备成功。此外，(+)-JQ1可以有效地抑制LPS/D-Gal联合诱导导致的过度激活的炎症反应，抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B分泌，降低血清ALT和AST水平，具有很好的肝脏保护作用。炎症反应受多条信号通路的调控，NF-KB信号通路则是其中之一。LPS是NF-KB强有力的激活剂，NF-KB信号通路激活可导致一系列炎症反应相关基因表达增加，NF-KB是多种炎症反应的中心环节[17,18]。当没有外界刺激时，NF-KB主要位于胞浆，以P65和P50组成的二聚体与IKB结合。当细胞受到刺激后，IKB蛋白发生磷酸化而降解，从而暴露出NF-KB，此时NF-KB二聚体由胞浆转入到细胞核，参与多种基因转录的表达，其中主要包括调控促炎细胞因子表达的基因。在ALF小鼠模型，NF-KB的激活会促使细胞凋亡信号通路的激活并且促进大量促炎细胞因子的释放，在肝细胞凋亡及肝损伤中发挥重要作用，与ALF的预后密切相关。本实验结果表明ALF模型组IKB蛋白表达明显减少，而P-P65和P-IKB蛋白表达显著增多。在(+)-JQ1干预后可明显下调P-P65和P-IKB蛋白的表达，在一定程度上恢复IKB蛋白的表达量。因此，考虑(+)-JQ1可能通过调节NF-KB信号通路来抑制促炎细胞因子的表达，抑制肝细胞的坏死，从而减轻肝组织结构和肝功能的损伤。目前，ALF尚无有效的治疗方法，(+)-JQ1在防治ALF中可能具有一定的临床应用价值，值得进一步探讨。
本文编号：3372986
【文章来源】：实用肝脏病杂志. 2020,23(06)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
各组小鼠肝脏大体观
各组小鼠肝组织病理学表现(HE,100×)
ALF是一种少见但病死率很高的临床疾病，可由多种因素导致。由于肝衰竭导致脑、肾、肺和心等功能衰竭，病情凶险。不论哪种病因均伴有肝内炎症细胞浸润，体内炎症反应过强或过弱均会给机体带来不良的影响[6-8]。ALF时过度激活的炎症反应可导致肝细胞坏死，加重肝脏损伤。当肝脏内细胞坏死和细胞再生无法达到平衡时则会发生ALF[9]。因此，精密调节炎症反应对疾病的控制至关重要[10-13]。有研究表明，BET蛋白在巨噬细胞释放促炎细胞因子过程中起到关键性作用，而其抑制剂(+)-JQ1可以有效地抑制过度激活的炎症反应[14-16]。经腹腔联合注射LPS/D-Gal诱导小鼠ALF是经典的ALF模型。LPS是革兰氏阴性菌的主要成分，它主要通过作用于肝脏枯否细胞来诱导肝损伤。LPS可刺激枯否细胞大量释放多种促炎细胞因子，包括TNF-α、IL-6和IL-1B，诱导ALF小鼠肝细胞坏死和凋亡。血清ALT和AST是肝脏损伤的重要标志。ALF患者血清ALT和AST会明显升高。在本实验中我们观察到ALF小鼠血清ALT和AST水平明显升高，而且促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B水平也明显升高，肝脏组织学表现为肝脏组织明显受损，证实ALF小鼠模型制备成功。此外，(+)-JQ1可以有效地抑制LPS/D-Gal联合诱导导致的过度激活的炎症反应，抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B分泌，降低血清ALT和AST水平，具有很好的肝脏保护作用。炎症反应受多条信号通路的调控，NF-KB信号通路则是其中之一。LPS是NF-KB强有力的激活剂，NF-KB信号通路激活可导致一系列炎症反应相关基因表达增加，NF-KB是多种炎症反应的中心环节[17,18]。当没有外界刺激时，NF-KB主要位于胞浆，以P65和P50组成的二聚体与IKB结合。当细胞受到刺激后，IKB蛋白发生磷酸化而降解，从而暴露出NF-KB，此时NF-KB二聚体由胞浆转入到细胞核，参与多种基因转录的表达，其中主要包括调控促炎细胞因子表达的基因。在ALF小鼠模型，NF-KB的激活会促使细胞凋亡信号通路的激活并且促进大量促炎细胞因子的释放，在肝细胞凋亡及肝损伤中发挥重要作用，与ALF的预后密切相关。本实验结果表明ALF模型组IKB蛋白表达明显减少，而P-P65和P-IKB蛋白表达显著增多。在(+)-JQ1干预后可明显下调P-P65和P-IKB蛋白的表达，在一定程度上恢复IKB蛋白的表达量。因此，考虑(+)-JQ1可能通过调节NF-KB信号通路来抑制促炎细胞因子的表达，抑制肝细胞的坏死，从而减轻肝组织结构和肝功能的损伤。目前，ALF尚无有效的治疗方法，(+)-JQ1在防治ALF中可能具有一定的临床应用价值，值得进一步探讨。
本文编号：3372986
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