富马酸二甲酯减轻LPS诱导的心肌细胞线粒体损伤的机制研究

发布时间：2021-10-28 08:04

　　背景脓毒症是一种严重威胁人类生命的全身性炎症反应综合征,可发展为脓毒性休克及多器官功能障碍综合征。资料显示,罹患心功能障碍的脓毒症患者的死亡率约为70%-90%,明显高于无心功能不全患者（20%）。大量的研究表明,氧化应激、线粒体结构和功能受损是脓毒症诱导心功能障碍的基本病理生理学机制。然而,目前对脓毒症诱导的心功能障碍缺乏有效的治疗策略。富马酸二甲酯（Dimethyl fumarate,DMF）是一种富马酸的衍生物,可在酯酶水解的作用下,生成富马酸单甲酯。由于DMF及其代谢产物在神经、肝脏、心脏等多种组织中均表现出抗炎和抗氧化的特性。因此,我们推测它也可能对抗脓毒症引起的心肌损伤。核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）是细胞中对抗氧化应激损伤的一种重要的保护性蛋白,多表达于心脏、肺和肝脏。当细胞受到刺激时,Nrf2可从细胞质转位进入细胞核内,与基因启动子区域的抗氧化反应元件结合,从而促进具有抗氧化特性的靶基因的表达。已有研究表明,DMF对神经的保护作用是通过Nrf2依赖性机制而实现的。Nrf2是否在DMF对抗脓毒症诱导的... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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DMF对LPS诱导的H9C2细胞损伤的影响（Mean±SEM，n=6）

浙江大学硕士学位论文正文203.2DMF抑制LPS诱导的H9C2细胞凋亡用流式细胞技术检测细胞凋亡情况（图2）。结果显示，LPS刺激后，H9C2细胞的凋亡率增加。用10、20、或40μMDMF预处理后，LPS诱导的细胞凋亡明显受抑制，细胞凋亡率分别为3.17±0.31%、2.57±0.16%、和2.93±0.15%（与LPS组的5.93±0.62%相比，P<0.01）。而40μMDMF对细胞凋亡的抑制作用并未优于低浓度DMF。图2.DMF对LPS诱导的H9C2细胞凋亡的影响（Mean±SEM，n=6）。（A）代表性流式细胞仪结果图。（B）数据统计分析结果。**P<0.01vs对照组；##P<0.01vsLPS组。A5:AnnexinVFITC；PI:propidiumiodide。

浙江大学硕士学位论文正文213.3DMF诱导心肌细胞Nrf2及其下游蛋白HO-1的激活利用免疫荧光技术在显微镜下观察到，LPS处理后，心肌细胞总Nrf2蛋白表达和细胞核Nrf2蛋白量明显减少；DMF预处理不仅可使细胞总Nrf2表达量明显增加，同时促进Nrf2从细胞质向细胞核转运（图3）。Westernblotting结果也进一步证实了，LPS可引起H9C2细胞总Nrf2蛋白表达和核Nrf2水平分别降低为对照组的0.39±0.01和0.17±0.01（P<0.05vs对照组，图4）。而DMF预处理后，可增加LPS处理后心肌细胞总Nrf2蛋白和核Nrf2蛋白水平，降低细胞质Nrf2蛋白水平（P<0.05，图4）。同时，在受LPS攻击的心肌细胞中，DMF预处理还明显增高HO-1蛋白的表达（图4A和F）。根据以上结果，我们选择DMF（40μM）来进一步研究其对抗LPS损伤的心肌保护机制。图3免疫荧光法检测DMF预处理后Nrf2蛋白在细胞内分布的变化。绿色为Nrf2蛋白，蓝色（DAPI）为细胞核。标尺为20μm。


本文编号：3462524