IL-33对脓毒症小鼠脾脏树突状细胞焦亡和功能的影响

发布时间：2022-12-25 10:09

　　目的:本研究探究脓毒症状态下白细胞介素（Interleukin）-33表达水平与小鼠脾脏树突状细胞（DC）焦亡、功能改变的关系及其与免疫功能障碍的内在联系。方法:正常小鼠随机分为假伤组、CLP组、sST2干预组。采用盲肠结扎穿孔（Cecal ligation and puncture,CLP）方法复制脓毒症小鼠模型;假伤组（Sham组）除不进行盲肠穿孔外,其与处理方法同CLP组;sST2（可溶性ST2受体,可结合IL-33,拮抗其生物学功能）干预组于CLP术后1 h经腹腔注射重组sST2（每只10μg,溶于200μL PBS中）,同批对照CLP组同时给予200μL PBS腹腔注射。另设IL-33处理组,给予正常小鼠腹腔注射重组IL-33（每只5μg,溶于200μL PBS中）,同批正常对照组给予200μL PBS腹腔注射。采用免疫磁珠分离提纯小鼠脾脏DC。正常小鼠脾脏DC体外培养并给予不同浓度（0、1、10、100 ng/mL）、不同时间（12和24 h）重组IL-33刺激。采用流式细胞术检测各组DC焦亡情况以及DC表面标志分子CD80、CD86、主要组织相容性复合物-II（MHC-I... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 脓毒症简介
    1.2 树突状细胞与脓毒症的研究进展
        1.2.1 树突状细胞分类
        1.2.2 树突状细胞在脓毒症免疫调控中的作用
    1.3 IL-33的研究进展
        1.3.1 IL-33分子特征与生物活性
        1.3.2 IL-33介导炎症反应
        1.3.3 IL-33与脓毒症
    1.4 焦亡的研究进展
        1.4.1 细胞焦亡的简介
        1.4.2 细胞焦亡分子机制
        1.4.3 细胞焦亡对免疫反应的调控作用
    1.5 研究目的及意义
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验仪器及试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 盲肠结扎穿孔(CLP)小鼠脓毒症模型建立及分组
        2.2.2 小鼠脾脏树突状细胞的分离制备
        2.2.3 流式细胞术检测小鼠脾脏DC表面标志分子表达
        2.2.4 流式细胞术检测小鼠脾脏DC焦亡
        2.2.5 裂解法提小鼠脾脏DC蛋白
        2.2.6 裂解法提小鼠组织蛋白
        2.2.7 蛋白印迹法(Western blot)检测蛋白表达水平
        2.2.8 共聚焦显微镜观测细胞内蛋白表达
    2.3 统计学处理实验结果
第3章 实验结果
    3.1 不同时间点CLP脓毒症模型小鼠脾脏DC焦亡情况
        3.1.1 流式细胞术检测CLP小鼠脾脏DC焦亡率
        3.1.2 激光共聚焦检测CLP小鼠脾脏DC焦亡
        3.1.3 蛋白印迹检测CLP小鼠脾脏DC焦亡相关蛋白表达
    3.2 CLP小鼠脾脏IL-33表达水平
        3.2.1 CLP小鼠脾脏组织IL-33蛋白表达水平
        3.2.2 CLP小鼠脾脏DC胞内IL-33 表达水平
    3.3 CLP小鼠脾脏DC表面标志物表达情况
    3.4 重组IL-33(rmIL-33)对小鼠脾脏DC焦亡及功能状态的直接影响
        3.4.1 体外重组IL-33对小鼠脾脏DC功能状态的直接影响
        3.4.2 重组IL-33对小鼠脾脏DC焦亡及功能状态的直接影响
    3.5 sST2干预对小鼠脾脏DC焦亡率的影响
    3.6 sST2干预对小鼠脾脏DC表面标志分子的影响
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]白细胞介素-33对脓毒症小鼠脾脏树突状细胞免疫功能的影响[J]. 阴月,王丽雪,董宁,吴瑶,童亚林,祝筱梅,姚咏明.  感染、炎症、修复. 2019(04)
[2]HBV感染者血清IL-33表达水平与疾病进展的相关性研究[J]. 张玉丽,黄天壬,邓伟,黄月莹,曾洁,吴玲红.  应用预防医学. 2018(02)
[3]白细胞介素-33通过增强中性粒细胞的趋化作用从而减弱脓毒症效应[J]. 方涛,胡森.  中国危重病急救医学. 2010 (06)
[4]炎症复合体与炎症反应[J]. 祝筱梅,姚咏明,盛志勇.  生物化学与生物物理进展. 2010(02)
[5]脓毒症——挑战与对策[J]. 林洪远.  中国危重病急救医学. 2004(06)



本文编号：3726410