外用bFGF-胰岛素凝胶缓释剂对糖尿病难愈创面的影响

发布时间：2017-05-28 14:04

  本文关键词：外用bFGF-胰岛素凝胶缓释剂对糖尿病难愈创面的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本实验将糖尿病大鼠背部深Ⅱ。烫伤,模拟糖尿病难愈创面愈合。观察创面愈合时间、对比分析,探讨外用bFGF-胰岛素凝胶缓释剂对糖尿病难愈创面微血管及胶原蛋白Ⅲ表达的影响。方.法：选择SPF级雄性纯系Wistar大鼠,体重(250±40g),2月龄,甘肃省中医学院动物中心提供。第一步快速腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,第二步制备深Ⅱ度烫伤模型。将75只Wistar大鼠(250±40g)随机分为血糖正常大鼠空白缓释凝胶对照A组、糖尿病大鼠空白凝胶对照B组、糖尿病大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面应用胰岛素缓释凝胶对照C组、糖尿病大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面应用bFGF缓释凝胶D组、糖尿病大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面局部应用bFGF胰岛素缓释凝胶E组,每组各15只。分别在各组大鼠烫伤后第3d、7d、11d、15d、21d观察记录创面总面积(残余创面面积),透明膜法计算各组大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面愈合率,创面组织甲醛固定后行HE染色检查,观察大鼠背部深Ⅱ度烫伤创面病理视野下愈合情况。创面组织甲醛固定后行rat-CD31/Ⅲ型胶原免疫组化染色检查,检测各组大鼠背部创面组织中CD31、Ⅲ型胶原蛋白Ⅲ的表达情况。ELISA试剂盒检测各组大鼠背部创面中bFGF的含量。检测缓释凝胶制剂的体外释放稳定性情况。结果所制备的bFGF-胰岛素凝胶缓释剂具有适宜的黏附性,良好的保湿性,方便保存及涂抹。检测bFGF-胰岛素凝胶缓释剂,30 d内保持良好稳定性。各组大鼠除糖尿病模型造模注射STZ后死亡3只(已补充造模),正常血糖大鼠组、糖尿病大鼠组均存活至实验完成,创面未发现明显感染迹象。各组大鼠深二度烫伤创面给予干预措施前3d内,肉眼观察无明显变化和差异。观察7、11、15、21 d中,bFGF胰岛素缓释凝胶组大鼠创面愈合效果最佳,B组大鼠愈合率最低,E组愈合率最高。除第3d以外,各组大鼠背部深二度烫伤创面愈合率两两比较,结果差异均具统计学意义(即：P0.05)。各时间点组织学观察：E组大鼠创面组织中微血管化、肉芽组织生长和胶原纤维生长均优于其余各组。烫伤后随时间延长,各组大鼠创面组织中微血管、胶原蛋白Ⅲ表达逐渐增强,在实施干预措施的第15 d各项指标达高峰,干预的第21 d各项指标表达明显减弱；取各时间点大鼠背部创面组织免疫组织化学染色后观察后发现：CD31染色阳性细胞均于干预后的第3d已表达,随时间延长,各组大鼠背部创面组织中阳性染色细胞数量逐渐增加；从干预后的第15d免疫组化染色阳性细胞数量开始减少；各时间点D、E组cd31染色阳性及胶原蛋白Ⅲ表达数量明显优于其余各组,E组最高,B组大鼠创面组织中各项指标表达最低,各组间结果两两比较,结果差异均具统计学意义(即：P0.05)。结论1.外用bFGF缓释系统可促进糖尿病大鼠背部深二度烫伤创面愈合。2.外用bFGF-胰岛素凝胶系统可促进创面组织损伤的修复,提高创面愈合率；可促进创面组织中胶原的合成；促进创面组织微血管化,改善创面组织血液微循环有助于肉芽组织形成。
【关键词】：难愈创面 外用胰岛素 bFGF缓释凝胶 深Ⅱ度烫伤 创面愈合 糖尿病大鼠
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.1;R641
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-11
• 第一章 引言11-15
• 第二章 实验材料和法15-24
• 2.1 实验材料15-16
• 2.1.1 实验动物15
• 2.1.2 实验仪器15
• 2.1.3 实验试剂15-16
• 2.1.4 试剂配制16
• 2.2 实验方法16-20
• 2.2.1 糖尿病大鼠模型制备16-18
• 2.2.2 糖尿病创面模型制作18-19
• 2.2.3 bFGF-胰岛素缓释剂制备19
• 2.2.4 酶联免疫法测bFGF19
• 2.2.5 胰岛素标准曲线19
• 2.2.6 透析法测药物体外释放19-20
• 2.2.7 凝胶中bFGF的包封率和载药量20
• 2.2.8 创面面积愈合率20
• 2.3 实验分组20-21
• 2.4 实验干预措施21
• 2.5 糖尿病大鼠创面情况观察21-23
• 2.5.1 病理组织学观察21-22
• 2.5.2 rat-CD31免疫组织化染色22-23
• 2.5.3 Ⅲ型胶原蛋白免疫组化检测23
• 2.6 数据统计学分析23-24
• 第三章 结果24-36
• 3.1 缓释凝胶外观观察24
• 3.2 缓释药物释放24-26
• 3.2.1 bFGF标准品曲线24-25
• 3.2.2 体外缓释系统药物释放率25-26
• 3.3 动物实验结果26-36
• 3.3.1 创面肉眼大体观察26-28
• 3.3.2 组织学观察28-31
• 3.3.3 MVD(微血管密度)免疫组化检测31-33
• 3.3.4 Ⅲ型胶原蛋白免疫组化检测33-36
• 第四章 讨论36-40
• 第五章 结论40-41
• 参考文献41-44
• 致谢44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 姚庆君,贾赤宇,陈璧,汤朝武,徐明达,丁国斌,王洪涛;一种大鼠蒸气烫伤模型的建立[J];中华烧伤杂志;2004年03期

2 陆树良 ,向军 ,青春 ,金曙雯 ,廖镇江 ,史济湘;Effect of necrotic tissue on progressive injury in deep partial thickness burn wounds[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

3 雷静;刘旭昭;陈淡嫦;张永斌;汤顺清;;凝胶型胶原敷料修复糖尿病皮肤缺损及促进血管再生[J];中国组织工程研究;2014年52期

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本文编号：402766