利用iTRAQ探索脓毒症诊断及预后评估的新型生物学标记物的临床价值

发布时间：2017-07-03 21:06

  本文关键词：利用iTRAQ探索脓毒症诊断及预后评估的新型生物学标记物的临床价值

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【摘要】：目的：本实验旨在筛选并验证血清和尿液中具有相关性的可对脓毒症进行早期诊断、病情严重程度及其预后评估的新型生物标记物。 方法：收集2012年3月至2013年5月在中国人民解放军总医院呼吸科监护病房（RICU）、急诊科监护病房(EICU)和外科重症监护病房(SICU)的住院、满足脓毒症诊断标准两项或两项以上条件患者的血标本。应用iTRAQ联合LC-MS技术检测，其中SIRS患者10例，脓毒症生存患者10例，脓毒症死亡患者10例，对血清和尿液进行蛋白提取及核素标记、质谱检测，筛选候选差异蛋白，并进行生物信息学分析，进一步筛选具有临床价值的候选差异表达蛋白。采用ELISA双抗夹心法分别检测131例脓毒症患者和25例SIRS患者血清和尿液候选蛋白。记录标本收集对应时间患者的生命体征、CRP、PCT、血常规、血生化、凝血功能及动脉血气分析等资料。 结果：用iTRAQ定量蛋白质组学技术最终筛选出血尿一致性表达的候选差异蛋白为α-1-酸性糖蛋白（AGP）和维生素D结合蛋白（VDBP）。在ELISA验证中，血清中的AGP水平在脓毒症中明显高于SIRS组，优于CRP和PCT，，且在脓毒症亚组间差异具有显著统计学意义。尿液中AGP在脓毒症诊断及病情严重程度评估均无明显价值（p＞0.05）。血清和尿液VDBP水平在脓毒症和SIRS患者差异均无统计学意义，但是随着病情加重，血清VDBP浓度逐渐降低，具有统计学意义。且血清VDBP可预测脓毒症患者的转归。结论：本实验首次将定量蛋白质组学技术应用脓毒症患者血清和尿液标记物的筛选。我们发现，血清AGP可以有效地鉴别SIRS和脓毒症患者及评估脓毒症不同病情严重程度，血清VDBP可以对脓毒症患者的病情严重程度及预后进行客观评估。
【关键词】：iTRAQ 脓毒症 诊断 预后 生物标记物
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 英文缩略词表7-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-13
• 第一部分 应用蛋白质组学技术筛选脓毒症早期诊断及预后评估标志物13-35
• 第一章 前言13-17
• 第二章 材料与方法17-24
• 第一节 病例收集17-18
• 2.1.1 病例来源17
• 2.1.2 入选标准与排除标准17-18
• 2.1.3 标本与数据采集18
• 第二节 仪器与耗材18-20
• 2.2.1 主要试剂18-19
• 2.2.2 主要仪器19-20
• 第三节 实验方法20-24
• 2.3.1 定量蛋白质组学 iTRAQ 技术原理20
• 2.3.2 定量蛋白质组学 iTRAQ 技术实验流程20-21
• 2.3.3 蛋白鉴定21-22
• 2.3.4 生物信息学分析22
• 2.3.5 血清和尿液蛋白的聚类分析22-23
• 2.3.6 技术路线图23-24
• 第三章 实验结果24-31
• 第一节 质谱鉴定24-26
• 3.1.1 蛋白定量标准曲线24-25
• 3.1.2 鉴定到肽段的数量分布25
• 3.1.3 蛋白序列覆盖度统计25-26
• 第二节 生物信息学分析26-29
• 3.2.1 GO 功能分析26-27
• 3.2.2 COG 注释27-28
• 3.2.3 Pathway 代谢通路注释28-29
• 第三节 血清和尿液差异蛋白聚类分析29-30
• 第四节 血尿差异蛋白相关性分析30
• 第五节 差异蛋白筛选30-31
• 第四章 讨论31-34
• 第五章 结论34-35
• 第二部分 α-1-酸性糖蛋白、维生素D结合蛋白在脓毒症诊断及预后评估的临床价值35-80
• 第一章 前言35-37
• 第二章 材料与方法37-43
• 第一节 病例收集37-39
• 2.1.1 病例来源37
• 2.1.2 入选标准与排除标准37-38
• 2.1.3 标本与数据采集38-39
• 第二节 仪器与耗材39-43
• 2.2.1 主要试剂39
• 2.2.2 主要仪器39
• 2.2.3 酶联免疫法（enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA）39-42
• 2.2.4 统计学分析42-43
• 第三章 实验结果43-61
• 第一节 一般临床资料43-47
• 3.1.1 各组病例分布43
• 3.1.2 入组患者性别与脓毒症患者转归43-44
• 3.1.3 年龄与脓毒症患者转归44
• 3.1.4 入组患者基础疾病分布与脓毒症转归44-45
• 3.1.5 病因分布45
• 3.1.6 入组第 1 天时的 WBC、CRP、APACHE II 评分及 SOFA 评分情况45-47
• 第二节 血清α-1-酸性糖蛋白和维生素 D 结合蛋白对脓毒症早期诊断、病情严重程度评估的价值47-54
• 3.2.1 候选蛋白的初步筛选47
• 3.2.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清 AGP 和 VDBP 的标准曲线47
• 3.2.3 入组第 1 天 SIRS 及脓毒症患者的 AGP、VDBP、WBC、CRP、PCT 水平和 APACHE II、SOFA 评分47-49
• 3.2.4 脓毒症患者亚组间 AGP、VDBP、WBC、CRP、PCT 和 APACHE II、SOFA 评较49-51
• 3.2.5 血清中 AGP 和 VDBP 诊断脓毒症的价值51-52
• 3.2.6 各指标鉴别不同病情严重程度脓毒症患者的价值52-53
• 3.2.7 血清候选差异蛋白与 SOFA 评分相关性分析53-54
• 第三节 血清α-1-酸性糖蛋白和维生素 D 结合蛋白对脓毒症患者预后评估的价值54-57
• 3.3.1 各指标对脓毒症预后的评估价值54-55
• 3.3.2 各指标在生存组与死亡组动态变化55-56
• 3.3.3 脓毒症患者预后相关因素二分类变量 logistic 回归分析56-57
• 第四节 尿液中α-1-酸性糖蛋白和维生素 D 结合蛋白对脓毒症的诊断价值4957-61
• 3.4.1 SIRS 组和 moderate sepsis 组尿液 AGP、VDBP 水平57
• 3.4.2 尿液中 AGP、VDBP 对脓毒症的早期诊断价值57-58
• 3.4.3 尿液中 AGP、VDBP 对脓毒症患者病情严重程度的评估价值58-59
• 3.4.4 尿液中 AGP、VDBP 对脓毒症患者预后评估价值59-60
• 3.4.5 血液和尿液中 AGP、VDBP 的相关性分析60-61
• 第四章 讨论61-71
• 第一节 脓毒症的基本临床特征61-63
• 4.1.1 发病率与病死率61
• 4.1.2 性别对脓毒症的影响61-62
• 4.1.3 年龄对脓毒症的影响62-63
• 第二节 新生物标志物对脓毒症的诊断价值63-66
• 4.2.1 脓毒症发病机制的复杂性及寻找生物标志物的必要性63-64
• 4.2.2 α-1-酸性糖蛋白及维生素 D 结合蛋白简介64-65
• 4.2.3 血清 AGP、VDBP 对脓毒症的诊断价值65-66
• 第三节 新标志物对脓毒症严重程度的评估价值66-68
• 第四节 新标志物对评估脓毒症预后的价值68-69
• 第五节 尿中新标志物对脓毒症的价值69-70
• 本研究的不足之处70-71
• 第五章 结论71-80
• 综述80-88
• 参考文献84-88
• 附录A 急性生理功能和慢性健康状况评分系统88-92
• 附录B 脓毒症相关器官衰竭评估（即序贯器官衰竭评估）92-93
• 攻读硕士期间发表文章情况93
• 学术交流93-94
• 致谢94-95

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1 文爱清,蒋建新;脓毒症与基因多态性相关性研究进展[J];创伤外科杂志;2005年06期

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3 刘双,高伟;脓毒症的诊断与治疗[J];心肺血管病杂志;2005年02期

4 A case report ari I.K.;Mdná r Z.;Lá szló A.;L. Medve;张e

本文编号：515168