早期鸡胚活性粗提物的初步应用研究

发布时间：2017-07-16 09:24

  本文关键词：早期鸡胚活性粗提物的初步应用研究

  更多相关文章： 胚盘 小鼠 鸡胚活性粗提物 创伤 愈合

【摘要】：鸡早期胚盘细胞具有分化的多潜能性,可以分化成不同组织细胞,故认为鸡胚活性粗提物含有干细胞活性成分的特性。而干细胞疗法是通过调控细胞因子,修复受损的组织细胞,然后通过细胞间的相互作用及产生细胞因子帮助受损细胞重建的功能。经大量研究,证实了干细胞在神经再生、创伤修复和抗衰老等领域有重要的临床价值。因为鸡胚来源易获得,本试验采用鸡胚胎作为试验对象,从鸡胚中提取出鸡胚活性粗提物,比较不同离心转数,对提取鸡胚粗提物的影响。采用不同孵化时间的种蛋蛋黄饲喂小鼠,观察对小鼠的生长发育的影响。同时又探讨了鸡胚活性粗提物对于小鼠软组织创伤愈合的促进作进用,为鸡胚活性粗提物在临床治疗上的应用提供新的思路和借鉴。主要内容如下:1.探讨早期胚胎活性物分离的最佳时期,37℃培养箱孵化种蛋,收集鸡胚盘内的原代细胞,反复冻融,然后提取鸡胚盘细胞内的活性物,对比差速离心对鸡胚干细胞活性物提取的影响。结果如下:孵化72h的鸡胚盘最大,胚盘内的细胞最多。差数离心转数越高,提取的鸡胚活性粗提物越多。2.探讨不同时间孵化的种蛋蛋黄对小鼠的生长发育的影响。将未孵化鸡胚的种蛋蛋黄、孵化36h的种蛋蛋黄和孵化72h的种蛋蛋黄分别饲喂随机分配的三组小鼠,另外一组正常饲喂鼠料。结果显示:饲喂蛋黄的小鼠体重平均增长率为36%,与对照组平均增长率18.5%相比较体重增加明显;饲喂孵化种蛋蛋黄的小鼠与饲喂未经孵化的种蛋蛋黄的小鼠相比,其体重增加明显,差异显著(P0.05);尤其是饲喂孵化72h种蛋蛋黄的小鼠平均增长率42.4%,与对照组平均增长率18.5%相比体重增加更明显,差异极显著(P0.01),由此说明了蛋黄内的鸡胚干细胞或者细胞分泌的细胞因子有利于小鼠肠道吸收,促进小鼠体重增长,对小鼠的生长发育具有促进作用。探讨注射鸡胚活性粗提物对小鼠的影响。将提取的鸡胚活性粗提物皮下注射小鼠,观察小鼠。结果显示:小鼠体温会逐渐升高,此为小鼠对外来物质识别的过程,随后体温会逐渐恢复到正常水平。3.探讨鸡胚活性粗提物对小鼠组织创伤的作用。构建昆明小鼠软组织创伤模型,皮下注射和皮肤表面涂抹鸡胚活性粗提物。结果显示:在昆明小鼠组织缺损创面模型中,只用蛋黄的小鼠两侧伤口愈合几乎没有差别,而涂抹鸡胚活性粗提物的右侧伤口愈合速度比左侧未涂抹的伤口愈合速度要快。注射鸡胚活性粗提物的右侧伤口比未注射的左侧伤口愈合速度要快。探讨鸡胚活性粗提物对小鼠组织烫伤的作用。构建昆明小鼠组织烫伤模型,在烫伤处涂抹鸡胚活性粗提物。结果显示:涂抹鸡胚活性粗提物右侧伤口和左侧相比较,右侧的伤口愈合速度更快。组织学检查结果显示涂抹鸡胚活性粗提物试验组表皮和真皮层细胞修复能力强于对照组。结论:1通过鸡种蛋的孵化,发现鸡早期胚胎孵化72h为活性分离的最佳时期,孵化72h的鸡胚盘最大,胚盘内的细胞最多,提取的鸡胚活性粗提物最好。验证了经反复冻融法提取鸡胚活性粗提物的可行性。2不同时间段孵化的种蛋蛋黄对小鼠饲喂,发现孵化72h的种蛋蛋黄对小鼠的体重增长最为明显。推测鸡胚干细胞或者细胞分泌的活性成分能有利于小鼠肠道吸收,促进小鼠体重增长,对小鼠的生长发育具有促进作用。3通过对小鼠创伤模型的建立,发现局部注射或者涂抹鸡胚活性粗提物对于小鼠创伤的愈合具有促进作用,为鸡胚活性成分在创伤修复中的应用提供实验基础。
【关键词】：胚盘 小鼠 鸡胚活性粗提物 创伤 愈合
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q813;R641
【目录】：

• 致谢4-8
• 摘要8-10
• 文献综述10-18
• 1 早期哺乳动物胚胎干细胞的研究现状10-13
• 1.1 小鼠ES细胞的研究进展11
• 1.2 人胚胎干细胞（h ES）的研究进展11-13
• 1.3 禽类早期胚胎干细胞的研究进展13
• 2 鸡胚胎发育规律的研究概况13-15
• 2.1 鸡的生殖生理特点13-14
• 2.2 鸡胚胎发育的研究14-15
• 3 胚胎干细胞的治疗及问题15-16
• 3.1 胚胎干细胞的治疗15
• 3.2 胚胎干细胞治疗中存在的问题15-16
• 3.2.1 胚胎干细胞的成瘤性15-16
• 3.2.2 胚胎干细胞的免疫排斥16
• 3.2.3 胚胎干细胞遗传的不稳定性16
• 4 本研究的目的和意义16-18
• 引言18-19
• 试验一 鸡胚活性粗提物的分离提取19-26
• 1 材料与方法19-20
• 1.1 试验材料19
• 1.1.1 试验种蛋19
• 1.1.2 主要试剂19
• 1.1.3 主要仪器设备19
• 1.2 试验方法19-20
• 1.2.1 受精蛋的培养19
• 1.2.2 鸡胚盘细胞活性物的提取19-20
• 1.2.2.1 鸡胚盘细胞的收集19
• 1.2.2.2 X期胚盘细胞的分离方法19-20
• 1.2.2.3 鸡胚盘细胞的染色镜检20
• 1.2.2.4 鸡胚盘细胞的反复冻融及活性物提取20
• 2 试验结果与分析20-23
• 2.1 受精蛋胚胎发育情况20-21
• 2.2 鸡胚盘细胞的鉴定21-22
• 2.3 胚盘细胞的反复冻融及活性物的粗提取22-23
• 3 讨论23-26
• 3.1 胚胎发育过程中的形态记录23-24
• 3.2 鸡胚盘细胞不同提取方法的比较24-26
• 试验二 鸡胚活性粗提物对小鼠生长发育的影响26-29
• 1 材料与方法26-27
• 1.1 试验材料26
• 1.1.1 试验动物26
• 1.1.2 主要试剂26
• 1.1.3 主要仪器设备26
• 1.2 试验方法26-27
• 1.2.1 饲喂小鼠不同时间孵化的种蛋蛋黄对其体重的影响26
• 1.2.2 注射鸡胚活性粗提物对小鼠体温的影响26-27
• 2 试验结果与分析27-28
• 2.1 对比不同时间孵化的种蛋蛋黄对小鼠体重的影响27
• 2.2 皮下注射鸡胚活性粗提物对小鼠体温的影响27-28
• 3 讨论28-29
• 3.1 对比不同时间孵化的种蛋蛋黄对小鼠生长发育的影响28
• 3.2 皮下鸡胚干细胞活性物对小鼠体温的影响28-29
• 试验三 鸡胚活性粗提物对小鼠组织创伤的作用29-44
• 1 材料与方法29-31
• 1.1 试验材料29
• 1.1.1 试验动物29
• 1.1.2 主要试剂29
• 1.1.3 主要仪器设备29
• 1.2 试验方法29-30
• 1.2.1 小鼠伤口模型的制作方法29
• 1.2.2 小鼠伤口创面的处理29-30
• 1.2.3 小鼠烫伤模型的制作方法30
• 1.2.4 小鼠烫伤创面的处理30
• 1.3 切片的制备30-31
• 1.3.1 切片制作步骤30
• 1.3.2 染色30-31
• 2 试验结果与分析31-41
• 2.1 涂抹鸡胚活性粗提物对小鼠伤口的影响31-33
• 2.2 注射鸡胚活性粗提物对小鼠伤口的影响33-36
• 2.3 涂抹蛋黄对小鼠伤口的影响36
• 2.4 涂抹鸡胚活性粗提物对小鼠烫伤的影响36-40
• 2.5 小鼠烫伤处组织切片病理学观察结果40-41
• 3 讨论41-44
• 3.1 鸡胚活性粗提物对小鼠创伤的影响41-42
• 3.2 鸡胚活性粗提物对小鼠烫伤的影响42-44
• 小结44-46
• 参考文献46-51
• Abstract51-52

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本文编号：548020