肝损伤大鼠血清对脐带间充质干细胞的影响

发布时间：2017-07-31 09:04

  本文关键词：肝损伤大鼠血清对脐带间充质干细胞的影响

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【摘要】：目的 寻找分离、扩增、鉴定脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的方法,探讨肝损伤大鼠血清对]hUCMSCs的肝向诱导分化作用,为临床上利用hUCMSCs治疗终末期肝病患者提供实验依据。 方法 1.采用酶消化法分离培养hUCMSCs,在显微镜下观察提取的脐带源间充质干细胞的形态学改变。 2.流式细胞仪检测间充质干细胞标记CD73、CD105及造血干细胞标记CD3、CD45的表达。 3.使用成脂诱导剂诱导分化23天后用油红O染色,成骨诱导剂诱导分化21天后用茜素红染色。 4.建立急性肝损伤大鼠模型：模型组腹腔注射四氯化碳-大豆油溶液,对照组腹腔注射等剂量的大豆油,48小时后腹主动脉取血,检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),取大鼠肝组织进行HE染色,显微镜下观察这两组大鼠肝脏病理学变化。 5.分别将肝损伤大鼠血清和胎牛血清用于培养hUCMSCs,分为实验组和对照组。实验组：20%模型组大鼠血清配成的培养基培养hUCMSCs,对照组：20%胎牛血清配成的培养基培养hUCMSCs。观察诱导前、实验组及对照组培养后hUCMSCs细胞形态学改变,检测培养液上清AFP、ALB值变化。 结果 1.倒置显微镜下可见原代hUCMSCs贴壁生长,呈短梭形,6-7天后生长速度加快,细胞呈梭形,表现为编织状或旋涡状生长。 2.经流式鉴定发现hUCMSCs表达CD73、CD105等间充质干细胞标记,不表达CD34、CD45等造血细胞标记。 3.P3代hUCMSCs成脂定向诱导23天后,未加成脂诱导剂的对照组细胞油红。染色阴性,加入成脂诱导剂的实验组细胞油红O染色强阳性,大部分细胞中可见红色的脂肪空泡。P3代hUCMSCs成骨定向诱导21天后,未加成骨诱导剂的对照组茜素红染色阴性,加入成骨诱导剂的实验组细胞茜素红染色阳性,可见细胞间有黑色颗粒沉积,颗粒大小不等,形态不一,提示有黑色矿物质沉积。 4.四氯化碳模型组大鼠血清与对照组相比,ALT、AST升高明显,差异具有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠肝组织光镜下可见肝窦结构消失,肝细胞脂肪变性、灶状坏死,细胞核固缩、碎裂或溶解,肝细胞间及汇管区可见少量炎性细胞浸润。对照组光镜下见肝组织结构清晰,无细胞水肿、变性及坏死,无炎性细胞浸润。 5.肝损伤大鼠血清培养hUCMSCs第1天细胞形态变化不大,呈梭形,仍呈编织状或旋涡状生长。第2天细胞呈短梭形,第3天细胞呈类圆形,第4天呈圆形,并有极少量细胞漂浮。对照组细胞呈长纤维状。肝损伤大鼠血清培养hUCMSCs四天后检测上清液ALB发现实验组ALB较诱导前和对照组均有升高趋势(P0.001),AFP无明显变化。 结论 1.可从脐带组织中成功提取间充质干细胞。 2.提取的干细胞能贴壁生长,可表达间充质干细胞标记CD73、 CD105,不表达造血干细胞标记CD34、CD45,具有向脂肪细胞、骨细胞分化的潜能。 3.10%四氯化碳-大豆油溶液腹腔注射可导致急性肝损伤,模型存活率高。 4.肝损伤大鼠血清可使脐带间充质干细胞向肝样细胞分化。
【关键词】：脐带间充质干细胞 肝损伤 肝样细胞
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.3
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 目录11-12
• ~.略词12-13
• 第一部分 脐带间充质干细胞的分离、提取及鉴定13-27
• 前言13-14
• 材料和方法14-18
• 结果18-22
• 结论22
• 讨论22-27
• 第二部分 肝损伤大鼠血清对脐带间充质干细胞的影响27-38
• 前言27-29
• 材料及方法29-31
• 结果31-35
• 结论35
• 讨论35-38
• 参考文献38-41
• 综述41-55
• 参考文献50-55
• 在读期间发表的学术论文55-56
• 致谢56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 郑学峰;刘霞;;hUCMSCs腹腔移植治疗大鼠急性肝损伤后的病理变化[J];解剖科学进展;2012年04期

2 任红英;赵钦军;刘拥军;卢士红;李妍涵;韩忠朝;;脐带间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞样细胞的研究[J];山东医药;2008年30期

3 Hosny Salama;Abdel-Rahman N Zekri;Abeer A Bahnassy;Eman Medhat;Hanan A Halim;Ola S Ahmed;Ghada Mohamed;Sheren A Al Alim;Ghada M Sherif;;Autologous CD34~+ and CD133~+ stem cells transplantation in patients with end stage liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2010年42期

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本文编号：598352