人脐带间质干细胞来源exosomes介导miR-92b参与修复大鼠急性心肌梗死损伤机制

发布时间：2017-08-14 18:26

  本文关键词：人脐带间质干细胞来源exosomes介导miR-92b参与修复大鼠急性心肌梗死损伤机制

  更多相关文章： 人脐带间质干细胞 exosomes 急性心肌梗死 损伤 修复 miR-92b Smad7

【摘要】：目的体内外分别构建稳定高效的exosomes修复SD大鼠AMI模型及exosomes修复原代培养的心肌细胞缺血缺氧损伤模型,明确exosomes对AMI的治疗作用,找出exosomes修复AMI过程中起关键作用的miRNAs,探讨其修复机制,为exosomes用于临床心肌梗死病人的治疗提供实验依据。方法通过蔗糖重水层密度梯度离心法与分子筛超滤法相结合的方法分离浓缩hucMSC-exosomes,用纳米颗粒分析仪进行鉴定;采用结扎左冠状动脉前降支构建体内SD大鼠AMI模型,经超声心动图和western blot验证;在分离获得hucMSC-exosomes以及成功构建体内外缺氧模型的基础上,通过给予hucMSC-exosomes治疗,分别采用超声心动图及western blot检测hucMSC-exosomes体内外对心肌的影响;通过荧光定量PCR确定相关microRNA在exosomes中含量,通过生物信息学分析进行靶基因预测,转染miR-92b mimics及inhibitor,验证Smad7在mRNA及蛋白水平变化,探讨hucMSC-exosomes对AMI损伤修复过程中microRNA可能的分子机制。结果成功分离了hucMSC-exosomes及构建体内外exosomes修复心肌细胞缺氧损伤模型。荧光定量PCR检测出exosomes中miR-92b含量较高;exosomes修复的心肌梗死大鼠中,血清mi R-92b上调;同时,心肌组织中的miR-92b也上调。Exosomes治疗及转染miR-92b mimics后心肌细胞Smad7上调。结论在exosomes修复心肌梗死过程中,exosomes中富含的miR-92b可能是通过调节Smad7进而促进心功能恢复。
【关键词】：人脐带间质干细胞 exosomes 急性心肌梗死 损伤 修复 miR-92b Smad7
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.22
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 绪论14-24
• 1.1 间质干细胞与缺血性心脏病14-15
• 1.1.1 间质干细胞来源及生物学特征14
• 1.1.2 间质干细胞与缺血性心脏病14-15
• 1.2 exosomes与心血管疾病15-16
• 1.2.1 exosomes的来源及生物学特性15
• 1.2.3 exosomes与心血管疾病15-16
• 1.3 microRNA与心肌梗死16-22
• 1.3.1 microRNA生物合成及作用方式16
• 1.3.2 microRNA与心肌梗死16-22
• 1.4 小结22-24
• 第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义24-26
• 2.1 研究目的24
• 2.2 研究方法24-25
• 2.3 实验设计方案25
• 2.4 研究意义25-26
• 第三章 exosomes修复急性心肌梗死过程中相关microRNA表达量测定26-48
• 3.1 材料与仪器26-28
• 3.1.1 主要材料26-27
• 3.1.2 主要仪器27-28
• 3.2 方法28-35
• 3.2.1 hucMSC的分离培养、hucMSC-CM的制备及hucMSC-exosomes的分离纯化鉴定保存28-29
• 3.2.2 乳鼠原代心肌组织来源细胞培养29
• 3.2.3 细胞冻存、复苏、培养、传代与计数29-30
• 3.2.4 构建SD大鼠急性心肌梗死模型30-31
• 3.2.5 小动物高频彩色超声仪检测术后大鼠心功能31
• 3.2.6 大鼠原代心肌细胞缺氧模型的建立31-32
• 3.2.7 Western blot32
• 3.2.8 组织与血清标本的处理及保存32-33
• 3.2.9 细胞及组织中总RNA的提取33
• 3.2.10 血清及exosomes中总RNA提取33-34
• 3.2.11 逆转录反应及荧光定量RT-PCR34-35
• 3.2.12 实验数据处理与统计35
• 3.3 结果35-42
• 3.3.1 hucMSC的形态特征35-36
• 3.3.2 hucMSC-exosomes大小及浓度检测36-38
• 3.3.3 乳鼠原代心肌组织细胞的形态特征38
• 3.3.4 实验动物分组38-39
• 3.3.5 给予hucMSC-exosomes治疗后大鼠心脏功能改善39
• 3.3.6 exosomes减少缺氧诱导的原代心肌细胞凋亡相关蛋白表达39-40
• 3.3.7 exosomes中microRNAs表达变化40-41
• 3.3.8 心肌梗死大鼠血清中microRNA变化41
• 3.3.9 心肌梗死大鼠心脏组织中microRNA变化41-42
• 3.4 讨论42-48
• 第四章 miR-92b影响损伤心肌细胞修复的机制探讨48-62
• 4.1 材料与仪器48-49
• 4.1.1 主要材料48
• 4.1.2 主要仪器48-49
• 4.2 方法49-51
• 4.2.1 生物信息学分析49
• 4.2.2 miRNA-mimics/Inhibitor转染49
• 4.2.3 提取蛋白49-50
• 4.2.4 蛋白定量（BCA Protein Assay Kit，，PIERCE, Inc.）50
• 4.2.5 引物设计50-51
• 4.2.6 定量PCR检测Smad7的mRNA变化51
• 4.2.7 Western blot检测Smad7变化51
• 4.2.8 统计学处理51
• 4.3 结果51-59
• 4.3.1 microRNA-92b的生物信息学特征51-52
• 4.3.2 microRNA-92b靶基因预测及验证52-56
• 4.3.3 exosomes处理心肌细胞H9C2(2-1) Smad7的mRNA变化56-57
• 4.3.4 miRNA-mimics/Inhibitor转染浓度摸索57-58
• 4.3.5 Western blot检测miR-92b靶基因Smad7变化58-59
• 4.4 讨论59-62
• 结论与展望62-63
• 参考文献63-73
• 致谢73-74
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加会议74

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期

2 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期

3 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期

4 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期

5 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期

6 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期

7 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期

8 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期

9 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期

10 孙同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陈伟;介绍一种简易的大鼠保定方法[J];上海实验动物科学;2004年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文编号：674082