肠源性内毒素血症早期肝脏与肺损伤关系的研究

发布时间：2017-08-16 11:04

  本文关键词：肠源性内毒素血症早期肝脏与肺损伤关系的研究

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【摘要】：目的:通过研究经门、腔静脉途径注入内毒素后所致急性肺损伤的差异,以揭示肠源性内毒素血症早期肝脏与肺损伤的关系。方法:72只健康清洁级SD大鼠,体重220g±20g,将动物随机分为2组(采用随机数字表法):对照组(异硫氰酸荧光素组FITC,F组,36只),内毒素组(异硫氰酸荧光素-内毒素组FITC-LPS,L组,36只);F组和L组再分为门静脉亚组(M组,18只)和腔静脉亚组(Q组,18只);每个亚组再按15min、30min、60min分为12个次亚组,每个次亚组6只大鼠。F组大鼠经门、腔静脉注射FITC-0.9%氯化钠溶液1ml;L组大鼠经门、腔静脉注射FITC-LPS-0.9%氯化钠溶液1ml。各组按3个时间点心脏取血测定血浆LPS含量、血浆克拉拉细胞蛋白(CC16)含量、血浆TNF-α含量;处死动物后取肺组织,检测大鼠肺组织含水量(左肺湿/干比);经荧光显微镜下观察肺组织荧光标记的内毒素分布;HE染色光镜下观察肺组织损伤程度;采用免疫组化法测定肺组织克拉拉细胞蛋白(CC16)的表达;透射电镜下观察克拉拉细胞(Clara cells)的超微结构。结果:1.大鼠血浆内毒素含量:与对照组相比,内毒素组明显高于对照组,比较有统计学意义(P0.05)。LM组与LQ组比较,LM组血浆内毒素含量较LQ组明显减少,在各个时间点二者的差异均有统计学意义(P0.05)。2.大鼠血浆克拉拉细胞蛋白(CC16)含量:内毒素组高于对照组,比较有统计学意义(P0.05)。LM组与LQ组比较,LM组血浆中CC16含量较LQ组高,在3个时间段均有统计学意义(P0.05)。LM组与LQ组中30min-60min CC16含量增长的速度均低于15min-30min CC16含量增长的速度。3.大鼠血浆TNF-α含量:L组高于F组,比较有统计学意义(P0.05)。LM组血浆TNF-α含量比LQ组高,在15min、30min、60min差异均有统计学意义(P0.05)。4.大鼠肺组织荧光标记的内毒素检测:与F组比较,L组荧光素表达量多,随时间递增,LQ组荧光素表达明显高于LM组。5.大鼠肺组织含水量(左肺湿/干比)检测:与对照组相比,内毒素组高于对照组,比较有统计学意义(P0.05)。LM组与LQ组比较,LM组肺组织含水量较LQ组高,15min、30min、60min有统计学意义(P0.05)。6.HE染色光镜观察肺脏组织损伤:F组肺泡结构完整,肺泡囊清晰,肺泡间隔正常。15min时,LM组中性粒细胞及巨噬细胞浸润明显;LQ组肺泡上皮细胞水肿,肺泡隔增宽;30min时,LM组肺泡内大量炎性细胞渗出、水肿、出血,肺泡隔增宽,淋巴滤泡形成;LQ组肺泡上皮中度水肿,肺泡扩张,少量炎性细胞浸润。60min时,LM组和LQ组肺泡结构消失,肺泡实变、扩张,大量中性粒细胞及巨噬细胞浸润,细胞明显水肿。LM组比LQ组比较,LM组肺损伤程度严重,损伤评分有统计学差异(P0.05)。7.肺组织克拉拉细胞蛋白(CC16)免疫组化:在肺脏中,阳性染色为细胞浆呈棕黄色,即为大鼠肺脏克拉拉细胞蛋白(CC16)。与L组比较,F组评分明显升高,呈中度阳性表达,差异有统计学意义(P0.05)。LM组与LQ组比较,各时间点两组均呈弱阳性,LQ组评分均高于LM组,差异有统计学意义(P0.05)。8.透射电镜观察肺脏Clara细胞的超微结构:FM组和FQ组透射电镜下Clara细胞超微结构:胞体大,呈圆形或椭圆形,细胞表面有少量的短小微绒毛,细胞顶端呈帽状突入管腔。Clara细胞胞质内有较多滑面内质网、核糖体及线粒体。细胞胞质内含有膜包绕的、电子密度均匀的致密颗粒,这些致密颗粒即为Clara颗粒,可见颗粒边移,与细胞顶部的胞膜相贴。LM组和LQ组60min时Clara细胞超微结构显示:Clara细胞变性明显,核皱缩,核膜内陷,核周间隙消失,胞质内线粒体、滑面内质网、分泌颗粒均减少,胞质内Clara颗粒密度不均匀、呈脱颗粒状态。结论:1.肠源性内毒素血症早期即引发严重肺损伤,其原因可能与枯否氏细胞被激活,大量致炎因子的“瀑布”样释放有关。2.内毒素对肺脏的直接刺激,可能涉及其对肺脏保护体系的预启动等。
【关键词】：肠源性内毒素血症 急性肺损伤 内毒素 克拉拉细胞 克拉拉细胞蛋白(CC16) TNF-α
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 中英缩略词对照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-11
• 1 实验材料11-13
• 1.1 实验对象及分组11-12
• 1.2 主要实验材料12
• 1.3 主要实验仪器及设备12-13
• 1.4 主要试剂的配制13
• 2 实验方法13-20
• 2.1 动物模型制备13-14
• 2.2 动物组织提取14
• 2.3 观察指标及方法14-20
• 2.4 统计学方法20
• 3 实验结果20-31
• 3.1 大鼠血浆内毒素含量20-21
• 3.2 大鼠血浆克拉拉细胞蛋白21-22
• 3.3 大鼠血浆 TNF-α 含量22-23
• 3.4 大鼠肺组织荧光标记的内毒素检测23-24
• 3.5 大鼠肺脏含水量检测24-25
• 3.6 大鼠肺脏组织病理形态学观察及评分25-27
• 3.7 大鼠肺脏克拉拉细胞蛋白（CC16）免疫组化及评分27-29
• 3.8 透射电镜下肺脏 Clara 细胞超微结构变化29-31
• 4 讨论31-34
• 4.1 肠源性内毒素血症31
• 4.2 肠源性内毒素血症早期肝脏的生物学作用31-32
• 4.3 肠源性内毒素血症早期急性肺损伤32-33
• 4.4 肠源性内毒素血症早期肝脏与肺损伤关系33-34
• 5 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述:38-47
• 参考文献44-47
• 致谢:47-48
• 作者简介:48-49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：682902