硫化氢对尿源性脓毒血症急性肾损伤的保护作用及其机制

发布时间：2017-08-19 11:37

  本文关键词：硫化氢对尿源性脓毒血症急性肾损伤的保护作用及其机制

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【摘要】：目的 建立尿源性脓毒血症兔模型；观察尿源性脓毒血症肾组织内源性H_2S生成及其H_2S胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的变化；应用外源性硫化氢干预，探讨外源性硫化氢在尿源性脓毒血症急性肾损伤中的作用，了解H_2S对尿源性脓毒血症肾组织NF-κB表达的影响，从而揭示H_2S在尿源性脓毒血症肾损害中作用的可能机制。 方法 1、家兔左侧输尿管内注入大肠杆菌（ATCC25922），并结扎左侧输尿管远端，模拟上尿路急性梗阻并感染所致脓毒血症兔模型。 2、将30只健康雄性家兔随机分成五组，每组6只。正常组（Control组）；假手术组（Sham组）；脓毒血症组（sepsis组）；硫氢化钠2.8umol/kg组（NaHS2.8umol/kg组）;硫氢化钠8.4umol/kg组（NaHS8.4umol/kg组）。 3、每组动物按时间点又分为术前、术后24h、术后48h、术后72h4个时间观测点。分别于每个时间点观测肛温(RT)、呼吸(RR)、心率(HR)； 4、术前、术后24、48、72小时采血行外周血细胞计数分析(WBC、中性粒细胞、PLT)、肾功能(Cr、BUN）、血清C反应蛋白测定； 5、术前、术后24h、术后48h、术后72h4个时间点采血ELISA法测定血清TNF-α、IL-10含量；术后72h抽血血培养，血清鲎试验检测； 6、术后72h各组肾组织行HE染色，光学显微镜及透射电子显微镜下观察形态结构变化。免疫组织化学法检测各组肾组织的TNF-α、IL-10、NF-κB的蛋白表达。Tunel法检测肾组织细胞凋亡情况。 7、术后72h取肾组织检测CSE的活性；抽血测H_2S浓度。 结果 1.家兔的一般情况：实验家兔sham组与control组体温，呼吸频率、心率变化不大（P＞0.05）；sepsis组明显高于control、sham组（P＜0.05），NaHS2.8umol/kg组、 NaHS8.4umol/kg组低于sepsis组（P＜0.05），NaHS8.4umol/kg组低于sepsis组（P＜0.05）。 2.血液检测指标：各组术前血细胞计数（WBC、中性粒细胞、PLT）、CRP、Cr、Bun比较，无统计学意义。术后血细胞计数WBC、中性粒细胞、PLT、CRP、Cr、Bun结果：实验家兔control组与sham组比较，差别无统计学意义（P＞0.05）；sepsis组明显高于control、sham组（P＜0.05），NaHS2.8umol/kg组、 NaHS8.4umol/kg组有下降趋势，有统计学意义（P＜0.05），且NaHS8.4umol/kg组低于NaHS2.8umol/kg组（P＜0.05）。 家兔血清TNF-α、IL-10含量结果：control、sham组家兔血清TNF-α，IL-10变化无统计学意义（P＜0.05）；与control组比较，，sepsis组明显升高（P＜0.05）；NaHS2.8umol/kg组、NaHS8.4umol/kg组与sepsis组比较，血清TNF-α明显降低（P＜0.05），血清IL-10明显升高（P＜0.05），NaHS8.4umol/kg组与NaHS2.8umol/kg组比较P＜0.05。 术后72小时采血做血培养及鲎试验：sham组与control组比较P0.05，差异无统计学意义。sepsis组与control组比较，差异有统计学意义(P0.05)。鲎试验比血培养阳性率高（P=0.009）。 3.病理形态学： 左肾肉眼观：control组和sham组肾组织形态结构正常，sepsis组肉眼观肾脏充血水肿，多发脓肿，肾盂肾盏扩张积脓，粘膜充血、出血、水肿，髓质可见黄色条纹状病灶向皮质伸展，肾周围组织充血水肿，肾门淋巴结明显肿大。HE染色光镜：sepsis组肾盂、肾盏粘膜坏死、脱落大量中性粒细胞浸润，肾小球、肾小囊变形，肾小管管腔变大，肾间质炎症细胞浸润；电镜：sepsis组肾小球足突细胞融合、消失，系膜细胞和内皮细胞增生，线粒体嵴排列紊乱，空泡形成。NaHS2.8umol/kg组、NaHS8.4umol/kg组较sepsis组上述变化有所减轻。 4.免疫组织化学法测肾组织TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白：control组、sham组肾组织TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白呈微弱表达；TNF-α、NF-κB蛋白在sepsis组表达最强，NaHS2.8umol/kg组、NaHS8.4umol/kg组较sepsis组减弱； IL-10蛋白在NaHS2.8umol/kg组、 NaHS8.4umol/kg组表达增强，NaHS8.4umol/kg组高于NaHS2.8umol/kg组（P＜0.05）。 5.Tunel法检测肾组织细胞凋亡：control、sham组肾组织散在少量的肾小管上皮细胞凋亡。sepsis组成片的细胞凋亡及凋亡小体形成，与control组比较P=0.001。NaHS2.8umol/kg组、NaHS8.4umol/kg组较sepsis组细胞凋亡明显减轻（P0.05），NaHS8.4umol/kg组较NaHS2.8umol/kg组减轻更明显（P=0.02）。 6.术后72小时血浆硫化氢浓度及肾组织CSE检测：sepsis组血浆H_2S含量及肾组织CSE的活性与control组比较明显降低(P0.05)。NaHS2.8umol/kg组、NaHS8.4umol/kg组血浆H_2S含量较sepsis组明显升高(P0.05)。NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg组血浆H_2S含量与control组比较，P0.05。NaHS2.8umol/kg组、NaHS8.4umol/kg组肾组织CSE活性与sepsis组比较，P0.05。Sepsis组NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg组肾组织CSE活性与control组比较，P＜0.05。Control组、sham组、sepsis组血浆H_2S含量与肾组织CSE活性呈正相关（R=0.979，p＜0.01），内源性H_2S的生成与CSE活性正相关。 结论 1、将0.5ml/kg大肠杆菌（ATCC25922）注入左侧输尿管并结扎,72小时后能成功复制尿源性脓毒血症模型。 2、尿源性脓毒血症肾组织内源性硫化氢生成减少,CSE活性降低；外源性硫化氢可减轻尿源性脓毒血症肾损伤。 3、外源性硫化氢对尿源性脓毒血症肾损伤保护作用机制可能是通过抑制NF-κB的表达，下调TNF-α，上调IL-10及减轻肾脏细胞凋亡。
【关键词】：硫化氢 尿源性脓毒血症 保护作用 机制 家兔
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 英文缩写注解4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-16
• 材料与方法16-27
• 结果27-51
• 讨论51-59
• 结论59-60
• 参考文献60-71
• 综述71-78
• 参考文献75-78
• 硕士在读研期间发表的论文78
• 读研期间所获奖励78
• 读研期间参加的学术会议78-79
• 致谢79

【参考文献】

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本文编号：700514