骨髓内皮祖细胞治疗大鼠急性脑缺血的实验研究

发布时间：2017-08-26 06:25

  本文关键词：骨髓内皮祖细胞治疗大鼠急性脑缺血的实验研究

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【摘要】：脑卒中是神经系统最常见的疾病，严重地危害人类的健康。脑卒中血管受损时，EPCs能够选择性迁移并聚集在受损或缺血组织区形成血管。EPCs在心脑及肝肾等多种缺血性疾病中的研究日益增多，已成为研究热点。 目的：本研究旨在将大鼠骨髓内皮祖细胞注入大鼠急性脑缺血再灌注模型，探讨EPCs在急性脑缺血疾病治疗中的作用。 方法：采用密度梯度离心联合贴壁筛选法从Wistar大鼠骨髓分离获得单个核细胞（MNC），进行诱导培养，观察、记录细胞的生物学特征；选取EPCs特异性表面标志CD34、KDR对原代细胞进行免疫荧光检测。 使用线栓法制备Wistar大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型。取体重250-300g健康成年雄性Wistar大鼠60只，，随机分3组：假手术组12只（A组），PBS治疗组20只（B组），EPCs治疗组28只（C组）（移植EPCs后1d、3d、7d、14d取材，共4个检测时间点）。 （1）大鼠术后行神经行为学评分，1～3分者入选后续实验。 （2）TTC染色观察脑梗死范围。 （3）HE染色观察脑组织病理学变化。 （4）免疫组化法测定大鼠各个时间点VEGF、FGF-2的表达。显微镜下观察、记录阳性表达情况。运用SPSS17.0软件行统计学分析。 结果： (1)成功从大鼠骨髓分离并培养了内皮祖细胞 (2)贴壁细胞表面CD34、KDR免疫荧光表达阳性 (3)成功制备了大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。 (4)神经行为学评分：C组评分明显低于B组，治疗7天后评分差异更明显。 (5)TTC染色脑梗死体积：C组梗死体积明显小于B组，有统计学差异（P0.05）。 (6)VEGF、FGF-2的表达：C组VEGF和FGF-2表达明显增高，与其他两组相比均有统计学差异（P0.01） 结论： （1）可以从大鼠骨髓分离获得EPCs，成功在体外培养并进行鉴定，为缺血性脑血管病治疗提供基础。 （2）EPCs在急性缺血性脑卒中治疗中有较好的疗效，能促进新生血管形成，挽救缺血半暗带，减小梗死体积，明显改善神经损伤，促进神经功能恢复。
【关键词】：内皮祖细胞 脑缺血 血管内皮生长因子 成纤维细胞生长因子-2
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文单词缩写表12-13
• 第1章 绪论13-14
• 第2章 文献综述14-20
• 2.1 EPCS 的生物学特性14-15
• 2.1.1 EPCs 的来源及表面标志14
• 2.1.2 EPCs 的动员、归巢和诱导分化14-15
• 2.1.3 EPCs 的功能15
• 2.2 EPCS 在缺血性脑血管病中的作用15-17
• 2.2.1 EPCs 促进血管生长及内皮修复16-17
• 2.2.2 EPCs 促进神经生长17
• 2.3 EPCS 治疗缺血性脑血管病现状17-19
• 2.3.1 EPCs 移植治疗脑缺血17-18
• 2.3.2 EPCs 联合基因治疗18
• 2.3.3 EPCs 在支架中的应用18-19
• 2.4 结论与展望19-20
• 第3章 材料与方法20-30
• 3.1 实验材料20-23
• 3.1.1 主要仪器和设备20-21
• 3.1.2 主要试剂21
• 3.1.3 溶液配制及使用方法21-22
• 3.1.4 动物来源22-23
• 3.2 大鼠骨髓 EPCS 的分离、培养和鉴定23-24
• 3.2.1 大鼠骨髓单个核细胞的分离23
• 3.2.2 免疫荧光细胞化学23-24
• 3.3 动物模型的制备24-25
• 3.3.1 线栓来源24
• 3.3.2 大脑中动脉局灶性脑缺血模型的制备24-25
• 3.4 脑梗死模型的判定25-27
• 3.4.1 行为学判定25
• 3.4.2 TTC 染色判定25
• 3.4.3 大鼠局灶性脑缺血周边区立体定位移植25-26
• 3.4.4 移植术后大鼠行为学评分26-27
• 3.5 标本的制作和免疫组织化学染色方法27-28
• 3.5.1 大鼠的心脏灌流27-28
• 3.5.2 脑组织切片 HE 染色28
• 3.5.3 脑组织切片免疫组织化学染色（S-P 法）28
• 3.6 数据采集28-29
• 3.7 统计学分析29-30
• 第4章 结果30-41
• 4.1 骨髓 EPCS 的生长特性30-31
• 4.2 免疫荧光细胞化学31
• 4.3 各组大鼠神经行为学评分31-32
• 4.4 TTC 染色比较脑梗死体积32-33
• 4.5 病理学实验结果33-41
• 4.5.1 HE 染色33-35
• 4.5.2 脑组织 VEGF 免疫组织化学染色35-38
• 4.5.3 脑组织 FGF-2 免疫组织化学染色38-41
• 第5章 讨论41-45
• 5.1 EPCS 的生物学特性及其应用41-42
• 5.2 不同来源的 EPCS42
• 5.3 移植时间窗和剂量的选择42-43
• 5.4 脑缺血后 VEGF 和 FGF-2 的表达43-45
• 第6章 结论45-46
• 参考文献46-50
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 富奇志;齐志国;朱晓峰;谢鹏;;血管内皮祖细胞对共同植入缺血再灌注模型大鼠脑内的神经干细胞增殖、凋亡和血管形成的调节[J];第三军医大学学报;2010年06期

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3 杨亚荣;曾秋棠;郎明健;闵新文;郭敏;彭昱东;吉庆伟;张静;;内皮祖细胞移植对大鼠心肌梗死后缺血心肌血管再生及心功能的影响[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年25期

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本文编号：740201