大黄提取物联合骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝功能衰竭的实验研究

发布时间：2017-08-28 00:16

  本文关键词：大黄提取物联合骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝功能衰竭的实验研究

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【摘要】：目的：研究大黄提取物联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠急性肝功能衰竭的协同治疗作用 方法：用D-氨基半乳糖(1.5g/Kg)腹腔注射制备大鼠急性肝衰竭模型。密度梯度离心+贴壁筛选分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪鉴定MSCs。SD大鼠被随机分为五组(n=10),所有大鼠给予D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝功能衰竭。A组大鼠在D-氨基半乳糖造模后注射1ml的生理盐水；B组大鼠在D-氨基半乳糖诱导后24小时通过尾静脉注射含有1×106MSCs的1ml细胞悬液；C组大鼠在D-氨基半乳糖诱导后24小时每天一次用灌胃给予小剂量大黄液(0.25g/kg,10ml/kg),并在D-氨基半乳糖诱导后24小时尾静脉注射含有1×106MSCs的1ml细胞悬液；D组大鼠在D-氨基半乳糖诱导后24小时每天一次灌胃给予中剂量大黄液(0.5g/kg,10ml/kg),并在D-氨基半乳糖诱导后24小时尾静脉注射含有1×106MSCs的1ml细胞悬液；E组大鼠在D-氨基半乳糖诱导后24小时每天一次灌胃给予大剂量大黄液(1g/kg,10ml/kg),并在D-氨基半乳糖诱导后24小时尾静脉注射含有1×106MSCs的1ml细胞悬液。观察各组大鼠生存情况、肝功能指标、炎症因子水平及肝脏组织病理学改变情况。 结果：实验结果表明D-Gal导致大鼠急性肝衰竭,严重损伤肝组织,成功建模。流式细胞检测结果显示CD90+的细胞占总细胞数的百分比99%,CD45几乎不表达,表明密度梯度离心+贴壁筛选分离培养MSCs纯度高。从各组大鼠的生存情况看,D组能够明显延长生存时间,降低死亡率,与其他各组比较差异具有统计学意义(P0.05),其他各组间比较均无统计学差异(P0.05)。肝功能检测结果表明,B、C、D及E组大鼠谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST、总胆红素TBil及血浆氨等肝功能各项指标的改善明显,与A组比较差异有统计学意义(P0.05),其中D组大鼠肝功能各项指标下降速率最快,改善效果最明显,较B、C及E组差异有统计学意义(P0.05),其他治疗组间无统计学差异(P0.05)。在血清炎症因子水平方面,D组大鼠的改善情况较其他各组差异有统计学意义(P0.05),其他各治疗组也有一定的改善,但与A组比较无统计学差异(P0.05)。从肝脏组织病理评分结果可以看出,D组大鼠肝脏损伤程度明显减轻,较A组差异有统计学意义(P0.05),其他各治疗组也有一定的减轻,但与A组均无统计学差异(P0.05)。细胞增殖结果表明,B、C、D及E组大鼠细胞增殖明显增多,较A组差异有统计学意义(P0.05),其中D组有更多的增殖数目,较B、C及E组差异有统计学意义(P0.05),其他治疗组间无统计学差异(P0.05)。 结论：大黄能够改善肝脏炎症内环境,促进MSCs移植后细胞增殖,提高MSCs移植的治疗效果。中剂量的大黄联合MSCs移植治疗,对肝衰竭大鼠肝损伤病理学改变、肝功能各项指标及炎症因子水平改善效果更为明显。大黄和MSCs的联合治疗可以促进肝衰竭导致的肝损伤后的肝细胞再生和修复,对于急性肝衰竭患者的治疗具有良好的应用前景。
【关键词】：大黄提取物 骨髓间充质干细胞 细胞移植 急性肝衰竭 炎症环境
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.3
【目录】：

• 目录5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 第一章 理论研究13-34
• 1. 现代医学对急性肝衰竭的认识进展13-24
• 1.1 定义和分类13
• 1.2 病因和发病机制13-14
• 1.3 临床表现及诊断14-15
• 1.4 治疗15-24
• 2. 中医理论24-34
• 2.1 病名研究24
• 2.2 病因病机认识24-25
• 2.3 辩证分型25
• 2.4 治疗25-27
• 2.5 中医药对SIRS的干预27-30
• 2.6 大黄的研究30-34
• 第二部分 实验研究34-46
• 实验一 实验动物模型的制备34-38
• 1. 材料与方法34-35
• 1.1 材料34
• 1.2 方法34
• 1.3 统计学处理34-35
• 2. 结果35
• 2.1 一般观察35
• 2.2 生化检查35
• 2.3 组织病理检查35
• 3. 讨论35-38
• 实验二 大黄提取物联合骨髓间充质干细胞移植对急性肝衰竭治疗作用的实验研究38-46
• 1. 材料与方法38
• 1.1 实验动物38
• 1.2 仪器及试剂38
• 2. 实验方法38-42
• 2.1. 密度梯度离心+贴壁筛选分离培养大鼠MSCs38-39
• 2.2 流式细胞仪鉴定MSCs39
• 2.3 大黄提取物的制备39
• 2.4 实验动物的分组及处理39-40
• 2.5 标本采集及处理40
• 2.6 观察指标及检测方法40-42
• 2.7 统计学分析42
• 3. 结果42-46
• 3.1 MSCs形态学特征42
• 3.2 MSCs表而标志鉴定42
• 3.3 各组大鼠一般状况及行为学变化42-43
• 3.4 各组大鼠的生存情况43
• 3.5 各组大鼠的肝功能水平43
• 3.6 各组大鼠血清IL-1及TNF-a情况43-44
• 3.7 大鼠肝组织病理学改变情况44-45
• 3.8 免疫组织化学染色45-46
• 第三部分 结论46-50
• 参考文献50-62
• 附录62-66
• 攻读硕士学位期间取得的成果66-67
• 致谢67

【参考文献】

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本文编号：746475